光照應(yīng)激對雄性SD大鼠生精功能、睪丸和小腸內(nèi)annexin 5、GnRH及其受體表達(dá)的影響.pdf

1、應(yīng)激(stress)是指機(jī)體受到體內(nèi)外各種環(huán)境因素刺激時(shí)所作出的特異性和(或)非特異性反應(yīng)。長期處于應(yīng)激狀態(tài),機(jī)體的自穩(wěn)態(tài)將改變,從而誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生疾病。連續(xù)的光照刺激影響晝夜節(jié)律,以至對內(nèi)分泌系統(tǒng)特別是垂體.性腺軸產(chǎn)生重要改變,導(dǎo)致個(gè)體體重和性腺發(fā)育出現(xiàn)異常,影響GnRH、LH分泌的強(qiáng)度和持久性,從而對機(jī)體各個(gè)部分造成一定的影響。
　　 文獻(xiàn)報(bào)道,多種形式的應(yīng)激均能導(dǎo)致血漿糖皮質(zhì)激素水平迅速增加,睪酮水平變化,從而影響生殖功能,

2、有時(shí)導(dǎo)致不育。促性腺激素釋放激素(gonadotropinreleasinghormone,GnRH)由下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞合成,以脈沖方式分泌,經(jīng)垂體門脈系統(tǒng)進(jìn)入垂體前葉,與促性腺激素分泌細(xì)胞的GnRH受體(GnRHR)結(jié)合后,刺激黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)分泌,從而調(diào)節(jié)性腺內(nèi)配子形成和激素功能。而Annexin5是一種鈣離子依賴性磷脂酰絲氨酸結(jié)合蛋白,在組織中有廣泛的分布,包括睪丸間質(zhì)細(xì)胞和支持細(xì)胞。Annexin5具

3、有多種功能,如抗炎、抗凝血、蛋白激酶C(PKC)抑制劑等。Kwaminamietal,發(fā)現(xiàn)GnRH能促進(jìn)垂體促性腺細(xì)胞中annexin5的表達(dá),調(diào)節(jié)FSH和LH的分泌,提示GnRH及其受體、annexin5都可能參與并調(diào)節(jié)精子發(fā)生的過程。因此,本實(shí)驗(yàn)?zāi)M戰(zhàn)爭環(huán)境晝夜節(jié)律紊亂建立了一個(gè)持續(xù)光照應(yīng)激模型。研究光照應(yīng)激模型對雄性SD大鼠生精功能的影響,并檢測生殖系統(tǒng)的annexin5、GnRH及其受體的定位及蛋白、mRNA表達(dá)的變化,為進(jìn)一步

4、研究應(yīng)激對生殖的干擾及制定對應(yīng)激所致的生殖損害的保護(hù)策略提供實(shí)驗(yàn)依據(jù);同時(shí)也部分了研究光照應(yīng)激模型對SD大鼠小腸內(nèi)annexin5、GnRH受體的定位及蛋白表達(dá)的變化,為進(jìn)一步研究應(yīng)激對消化的干擾提供前期實(shí)驗(yàn)探索。
　　 本研究發(fā)現(xiàn)光照應(yīng)激14d后,大鼠體重、睪丸重量、睪丸指數(shù)、附睪重量、精子計(jì)數(shù)、睪酮分泌量和睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)均有明顯變化(P<0.05)。HE染色顯示睪丸內(nèi)生精小管變粗,管腔內(nèi)生精細(xì)胞增多;westernblot顯示

5、光照應(yīng)激14d后,3B-HSD蛋白表達(dá)量顯著高于對照組(P<0.05),21d、28d后,3β-HSD蛋白表達(dá)量繼續(xù)增加,與對照組相比差異極顯著(P<0.01)。在光照應(yīng)激不同時(shí)間段,annexin5、GnRH及其受體的定位也沒有明顯變化。持續(xù)光照14d、21d后,睪丸內(nèi)GnRHR的蛋白表達(dá)水平與相應(yīng)的對照組相比,差異顯著(P<0.05),持續(xù)光照28d后實(shí)驗(yàn)組GnRHR的蛋白表達(dá)水平逐漸降低無顯著差異。實(shí)驗(yàn)組大鼠GnRHR在mRNA表

6、達(dá)水平升高,但不同時(shí)間段與對照組相比均無顯著差異。光照應(yīng)激14d、21d后,睪丸內(nèi)annexin5蛋白和對照組相比顯著升高(P<0.01:P<0.05),28d逐漸降低無顯著差異。Annexin5在tuRNA表達(dá)水平升高,但不同時(shí)間段與對照組相比均無顯著差異。并且GnRH受體、annexin5蛋白表達(dá)在小腸內(nèi)和在睪丸中的蛋白表達(dá)呈現(xiàn)出相似的趨勢。
　　 結(jié)論:(1)光照應(yīng)激狀態(tài)下,雄性SD大鼠睪丸的生精功能受到了一定的影響,表現(xiàn)

7、為:睪丸內(nèi)3B-HSD的蛋白表達(dá)量增加,睪丸分泌功能上升,附睪尾精子相對計(jì)數(shù)增加,生精小管中生精細(xì)胞增加,睪酮分泌量增加。(2)光照應(yīng)激能誘導(dǎo)睪丸內(nèi)annexin5、CmRH受體在蛋白質(zhì)和mRNA水平在不同時(shí)間點(diǎn)發(fā)生量的變化,并呈現(xiàn)出升高的趨勢。(3)光照應(yīng)激能誘導(dǎo)小腸內(nèi)GnRH受體、annexin5在蛋白質(zhì)平在不同時(shí)間點(diǎn)發(fā)生量的變化,并呈現(xiàn)出升高的趨勢。我們以上的研究結(jié)果提示:CmRH及其受體可能作為應(yīng)激因子通過調(diào)節(jié)annexin5的