大鼠肝細胞GnRH受體的表達及其影響的研究.pdf

1、許多研究已經(jīng)證明促性腺激素釋放激素及其受體存在于下丘腦－垂體軸以外的器官和組織，例如胎盤滋養(yǎng)層細胞、前列腺、胰腺及一些腫瘤組織中[1.2.3]。Chegini等[4]首次證明了子宮平滑肌細胞上存在GnRH及其受體的mRNA。我們先前的研究也報道了胃腸胰系統(tǒng)能自身合成GnRH[5]，而且證實胃腸胰系統(tǒng)及甲狀腺均含有GnRH受體免疫反應(yīng)陽性物質(zhì)[6.7]。GnRH在下丘腦－腦垂體軸外生成的同時，其亦發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，Gurrie等[8]發(fā)現(xiàn)G

2、nRH可以使胎盤滋養(yǎng)層細胞內(nèi)[Ca2+]明顯升高，進而參與細胞內(nèi)的信號傳遞過程。Tache等[9]發(fā)現(xiàn)腦室及靜脈注射GnRH類似物后，胃液的pH值升高，其作用機制可能是GnRH類似物通過抑制迷走神經(jīng)而發(fā)揮間接的調(diào)節(jié)作用。
　　近年來在臨床上觀察到藥理劑量的GnRH類似物可導(dǎo)致糖代謝紊亂，但其發(fā)生機制尚不明確，有人認為可能與使用GnRH類似物時機體的性激素改變有關(guān)；GnRH對葡萄糖代謝是否存在直接作用未見報道。肝臟是物質(zhì)代謝的主要器

3、官，同時胃腸胰系統(tǒng)能自身合成GnRH，因此，肝臟細胞是否存在GnRH受體，GnRH是否在GnRH受體介導(dǎo)下對肝糖代謝產(chǎn)生影響是值得關(guān)注的問題。
　　研究方法：
　　取大鼠肝臟組織制成切片，運用免疫組織化學(xué)SABC法和原位雜交技術(shù)，觀察大鼠肝臟細胞是否存在GnRH受體；用原代培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠肝細胞，GnRH受體免疫組化、糖原染色比較不同濃度葡萄糖培養(yǎng)液對GnRH受體表達的影響。
　　研究結(jié)果：
　　(1)：大鼠肝細胞

4、呈GnRH受體免疫反應(yīng)陽性，陽性反應(yīng)物質(zhì)分布在細胞的細胞膜和細胞漿中，細胞核呈陰性反應(yīng)。一個肝小葉內(nèi)，靠近中央靜脈的肝細胞，其GnRH受體免疫反應(yīng)較強，著色較深，遠離中央靜脈的肝細胞，其GnRH受體的免疫反應(yīng)較弱，著色較淺。(2)：大鼠肝細胞GnRH受體的mRNA雜交信號物質(zhì)呈深棕色，背景不著色，反差明顯。信號物質(zhì)分布于細胞質(zhì)，細胞核未檢測到GnRH受體mRNA雜交信號，呈陰性反應(yīng)。一個肝小葉內(nèi)，靠近中央靜脈的肝細胞，其GnRH受體mR

5、NA雜交信號較強，著色較深，遠離中央靜脈的肝細胞，其GnRH受體mRNA雜交信號較弱，著色較淺。(3)：用SABC免疫組織化學(xué)染色法分別對葡萄糖濃度1g/L、葡萄糖濃度2g/L培養(yǎng)液培養(yǎng)的大鼠肝細胞行GnRH受體的免疫組織化學(xué)染色；鏡下觀察兩種葡萄糖濃度培養(yǎng)液培養(yǎng)條件下GnRH受體的表達，用圖像分析軟件對其進行光密度值分析，結(jié)果顯示正常葡萄糖濃度(1g/L)培養(yǎng)時肝細胞GnRH受體的表達強度明顯高于高糖培養(yǎng)液(2g/L)中肝細胞的表達(

6、P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　(1)大鼠肝細胞呈GnRH受體免疫反應(yīng)陽性，又有GnRH受體mRNA雜交信號，說明大鼠肝臟在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平能自身合成GnRH受體，同時此部位GnRH受體的分布具有中央靜脈旁肝細胞增多的特點。(2)GnRH受體的表達強度與細胞外液葡萄糖濃度有關(guān)，表現(xiàn)為正常葡萄糖濃度培養(yǎng)時肝細胞GnRH受體表達強度明顯高于高糖濃度培養(yǎng)，說明高濃度葡萄糖使肝細胞GnRH受體表達下調(diào)，提示腸胰系統(tǒng)產(chǎn)生的GnRH可能