腸外營養(yǎng)導(dǎo)致大鼠肝細(xì)胞周期和炎癥因子及受體基因表達(dá)的變化.pdf

1、全腸外營養(yǎng)(Total Parenteral Nutrition，TPN)技術(shù)的問世使各種病因所致的腸功能衰竭患者得以長期存活，是近代醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)展之一。隨著TPN技術(shù)的廣泛運(yùn)用，其不良反應(yīng)也日益受到人們的關(guān)注，其中TPN相關(guān)肝病(Total Parenteral NutritionAssociated Live Disease，PNALD)是該營養(yǎng)支持并發(fā)癥之一。盡管這一病變的嚴(yán)重性，但是其病因及病理生理機(jī)制仍不明確。本研究利用實(shí)時(shí)定

2、量PCR芯片技術(shù)，檢測(cè)。TPN后肝臟細(xì)胞周期基因和炎癥基因及受體表達(dá)的變化，探討哪些基因在肝臟損害中發(fā)揮作用，為臨床預(yù)防和治療PNALD提供資料。 第一部分 TPN導(dǎo)致肝細(xì)胞周期基因表達(dá)的變化 目的： 利用PCR基因芯片技術(shù)，檢測(cè)TPN后肝細(xì)胞周期基因的表達(dá)，探討TPN肝損傷的發(fā)病機(jī)制。 材料與方法： 選擇12只雄性SD大鼠，體重225～250克，沒有特殊病原體，代謝籠里適宜環(huán)境養(yǎng)一周，標(biāo)準(zhǔn)鼠進(jìn)食

3、喂養(yǎng)，自由水龍頭供水。維持12:12小時(shí)晝夜循環(huán)，溫度維持在22℃左右，相對(duì)濕度40％～60％。 動(dòng)物隨機(jī)分為兩組：TPN實(shí)驗(yàn)組(6只)和生理鹽水對(duì)照組(6只)。通過對(duì)兩組動(dòng)物頸靜脈置入硅膠管，連續(xù)24小時(shí)輸注營養(yǎng)液或生理鹽水。7天后應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR芯片檢測(cè)方法，比較兩組大鼠間肝臟細(xì)胞周期基因的表達(dá)。 結(jié)果： TPN實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水對(duì)照組比較： (1)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)兩組大鼠體重均增加，生理鹽水組增加更顯著；

4、 (2)TPN組大鼠肝臟病理表現(xiàn)為肝細(xì)胞彌漫脂肪空泡變性，小葉中央?yún)^(qū)較周邊更為明顯，一例肝細(xì)胞少量壞死； (3)電鏡表現(xiàn)為生理鹽水組大鼠肝臟明顯變化；TPN組表現(xiàn)少量淋巴細(xì)胞浸潤，肝血竇、毛細(xì)膽管擴(kuò)張，微絨毛脫落，線粒體基質(zhì)增生，肝細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞萎縮、核染色質(zhì)邊集，可見凋亡小體。 (4)兩組大鼠肝膽紅素沒有明顯變化，但TPN組AST升高； (5)TPN組大鼠肝臟細(xì)胞周期表達(dá)上調(diào)基因有Atm、Brcal、C

5、dknlb、Dnaic2、G2a、Nfatc1、Notch2、Pkd1、Ppp2r3a等；表達(dá)下調(diào)基因有Cdc25b、Ccnd1、E2f1、Mem3、Nek2、Wee1等。 結(jié)論： TPN組與生理鹽水對(duì)照組大鼠比較肝臟細(xì)胞周期基因表達(dá)存在差異，TPN組部分細(xì)胞基因出現(xiàn)改變，可能與TPN相關(guān)肝臟損傷的發(fā)生和發(fā)展直接相關(guān)。 第二部分 TPN導(dǎo)致肝臟炎癥因子及受體表達(dá)的變化 目的： 利用基因芯片技術(shù)，檢

6、測(cè)TPN后肝臟炎癥因子及受體基因的表達(dá)，探討TPN肝損的發(fā)病機(jī)制。 材料與方法： 同第一部分。 結(jié)果： (1)大鼠的體重、肝臟病理變化、肝臟電鏡檢查結(jié)果和肝生化檢查結(jié)果均同第一部分。 (2)TPN組肝臟炎癥因子及受體表達(dá)上調(diào)基因有C5/C5a、Cc121b、Cc125、Cc13、Cc17、Ccr1、Ccr2、Ccr3、Ccr5、Ccr6、Cx3c11、Cx3cr1、Cxc11、Cxc15、IL-1

7、0、IL-10R α、IL-11、IL-13ra1、IL-18、IL-1β、IL-1f5_predicted、IL1fi6_predicted、IL-1r1、IL-1r2、IL-2R β、IL-2r γ、IL-8rβ、Itgam、Itgb2、Ltb、Cxc14、TGF-β1、TNF、Tnfrsf1b、CD40Lg；TPN組肝臟炎癥因子及受體表達(dá)下調(diào)基因有CcL22、CCL24、IL-17b、IL-1a、IL-6r α、Mif。