觀察GnRH類似物調(diào)控大鼠睪丸間質(zhì)細胞annexin5、3β-HSD的表達及不同pH精子營養(yǎng)液對男性精子功能的影響.pdf

1、大鼠睪丸間質(zhì)細胞主要分布在生精小管間的結締組織中，約占睪丸重量的2％，但分泌的睪酮卻占睪酮總量的95％。間質(zhì)細胞的主要功能是合成和分泌睪酮，以調(diào)節(jié)生精作用、雄性第二性征和全身代謝。促性腺激素釋放激素(gonadotropin releasing hormones，GnRH)是由下丘腦神經(jīng)元細胞體合成并由其末端直接分泌入垂體門脈系統(tǒng)的一種十肽化合物，同時它選擇性地刺激促性腺細胞釋放促性腺激素LH和FSH。GnRH類似物是人工合成的九肽激素

2、，基于對垂體GnRH-R的作用將其分為激動劑(GnRHa)與拮抗劑(GnRHant)。人工合成的CnRHa與GnRH受體有高度的親和力，并可抵抗內(nèi)肽酶的降解而延長半衰期，產(chǎn)生類似于GnRH的作用；GnRHant主要是抑制促性腺激素的釋放，從而抑制生物體的性腺功能，它可能是通過直接抑制GnRH受體功能而發(fā)揮上述作用的。 膜聯(lián)蛋白5(annexin 5)是一種鈣離子依賴的磷脂結合蛋白，其分子量大約為36kD,是膜聯(lián)蛋白家族最主要的成

3、員之一。3β-羥類固醇脫氫酶(3β-HSD)是類固醇激素合成中睪丸所獨有的酶，催化睪酮合成的最后一步，它是鑒定睪丸間質(zhì)細胞的重要性指標。已有研究表明，睪丸間質(zhì)細胞存在GnRH受體，并且發(fā)現(xiàn)睪丸間質(zhì)細胞也有annexin 5的存在。睪丸局部注射超生理劑量的GnRH類似物，24h后，發(fā)現(xiàn)睪丸內(nèi)annexin 5的表達下降。生理劑量的GnRH類似物睪丸局部注射后，睪丸內(nèi)armexin 5的表達升高，這些研究結果表明GnRH對睪丸中annexi

4、n 5的表達具有調(diào)節(jié)作用。 考慮到GnRH受體和annexin 5在間質(zhì)細胞的存在。我們分析，GnRH類似物對annexin 5的表達可能是通過和間質(zhì)細胞上GnRH受體作用，而影響到間質(zhì)細胞內(nèi)的annexin 5表達的。為此，我們觀察了GnRH類似物對原代培養(yǎng)的大鼠睪丸間質(zhì)細胞中annexin 5、3β-HSD表達的影響。通過原代培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細胞，觀察不同濃度的GnRH類似物處理間質(zhì)細胞后，annexin 5、3β-HSD在

5、基因和蛋白質(zhì)水平的變化。實驗結果顯示，經(jīng)不同終濃度的GnRHa處理細胞后，annexin 5、3β-HSD的表達均升高，當GnRHa為10-5mol/L，10-6mol/L時，實驗組大鼠睪丸問質(zhì)細胞中annexin 5、3β-HSD mRNA和蛋白質(zhì)表達顯著高于對照組(未加GnRHa處理)。當GnRHa為10-7mol/L時，實驗組大鼠睪丸間質(zhì)細胞中annexin 5、3β-HSD mRNA和蛋白質(zhì)表達也升高，但無統(tǒng)計學意義。經(jīng)不同濃度

6、的GnRHant處理細胞后，annexin 5、3β-HSD的表達均有下降，當GnRHant的終濃度為10-6mol/L，10-7mol/L時，實驗組大鼠睪丸間質(zhì)細胞中annexin 5、3β-HSD mRNA和蛋白質(zhì)表達均顯著降低，與對照組比較，具有統(tǒng)計學意義。 GnRH類似物對原代培養(yǎng)的睪丸間質(zhì)細胞中annexin 5、3β-HSD表達的調(diào)節(jié)作用，可能是GnRH直接與睪丸間質(zhì)細胞上的GnRH受體相結合，啟動一系列信號轉(zhuǎn)導通路