荷盲腸腫瘤小鼠肝臟Th1-Th2細(xì)胞因子漂移及其與門靜脈IL-10、TGF-β1的相關(guān)性.pdf

1、結(jié)直腸癌是一種常見的惡性實(shí)體腫瘤，肝轉(zhuǎn)移是其預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。然而，目前結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)病機(jī)制尚不明確。當(dāng)今的研究重點(diǎn)是在腫瘤細(xì)胞的分子生物學(xué)機(jī)制上，在腫瘤免疫學(xué)方面的研究還不多。 結(jié)直腸腫瘤細(xì)胞經(jīng)門靜脈直接回流到肝臟，是其容易形成肝轉(zhuǎn)移的重要解剖學(xué)因素。此外，結(jié)直腸腫瘤還會(huì)經(jīng)門靜脈向肝臟回流其各種腫瘤可溶性產(chǎn)物，如IL-10和TGF—β1等。研究表明這些腫瘤可溶性產(chǎn)物可導(dǎo)致機(jī)體的免疫耐受和免疫抑制。但它們經(jīng)門靜脈回流后

2、對(duì)肝臟有無免疫抑制作用，尚無研究。 在轉(zhuǎn)移性肝癌和原發(fā)性肝癌的免疫學(xué)研究中，發(fā)現(xiàn)肝臟會(huì)出現(xiàn)Th1/Th2細(xì)胞因子(IFN—γ/ IL-10)失衡的現(xiàn)象，稱之為“漂移”，能促使腫瘤的進(jìn)展。在肝轉(zhuǎn)移發(fā)生之前，結(jié)直腸腫瘤可溶性產(chǎn)物IL-10和TGF—β1等持續(xù)經(jīng)門靜脈向肝臟回流，是否會(huì)導(dǎo)致肝臟Th1/Th2細(xì)胞因子的漂移，從而促使肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生,有待研究確定。 目的：探索在肝轉(zhuǎn)移發(fā)生之前，荷結(jié)直腸腫瘤機(jī)體的肝臟是否會(huì)出現(xiàn)免疫微環(huán)

3、境(Th1/Th2細(xì)胞因子的平衡)的改變，以及這種改變與門靜脈中的腫瘤可溶性產(chǎn)物IL-10、TGF-β1的相關(guān)性。 方法：研究對(duì)象為原位肝轉(zhuǎn)移模型動(dòng)物為SPF級(jí)BALB/c雄性小鼠，接種細(xì)胞株為小鼠結(jié)腸腺癌CT26細(xì)胞。1.細(xì)胞培養(yǎng)：CT26細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，配置單細(xì)胞懸液，接種于BALB/c雄性小鼠皮下，切取皮下腫瘤塊，制作盲腸接種用的腫瘤組織。2.建立原位肝轉(zhuǎn)移模型：小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組，每組各10只，第1組和第3組分別為

4、1周和2周對(duì)照組，第2組和第4組分別為1周和2周實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組：盲腸腫瘤塊種植法建立BALB/c小鼠原位結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型，1周和2周后提取門靜脈血及肝臟標(biāo)本，并處死小鼠。對(duì)照組：假手術(shù)組。3.標(biāo)本檢測(cè)：門靜脈血離心取血清，肝臟標(biāo)本勻漿制備上清，ELISA方法檢測(cè)門靜脈血IL-10、TGF—β1及肝臟細(xì)胞因子IFN—γ、IL-10表達(dá)。4.采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，數(shù)據(jù)采用SPSS15.0軟件包進(jìn)行分析。單因素方差分析(one—way ANOVA)

5、LSD比較組間差異，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雙變量相關(guān)分析方法比較實(shí)驗(yàn)組門靜脈IL-10、TGF—β1與肝臟IFN—γ/IL-10的相關(guān)性，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1.1周和2周實(shí)驗(yàn)組小鼠的門靜脈IL-10濃度分別為144.40±29.8 ug/l和221.10±40.50 ug/l，較1周和2周對(duì)照組的46.11±8.53ug/l和42.30±8.36ug/l顯著升高。單因素方差分析LSD檢驗(yàn)比較4

6、組間差異，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2.1周和2周實(shí)驗(yàn)組小鼠的門靜脈TGF—β1濃度分別為82.40±13.00 ug/l和123.50±19.50ug/l，較1周和2周對(duì)照組的50.30±8.36 ug/l和45.40±8.28 ug/l顯著升高。單因素方差分析LSD檢驗(yàn)比較4組間差異，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.1周和2周實(shí)驗(yàn)組肝臟IL-10濃度分別為383.52±56.05ug/l

7、和588.70±89.10ug/l，較1周和2周對(duì)照組的216.61±25.61 ug/l和278.58±53.64 ug/l顯著升高。單因素方差分析LSD檢驗(yàn)比較4組間差異，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4.1周和2周實(shí)驗(yàn)組肝臟IFN—γ濃度分別為465.21±95.62ug/l和340.13±62.31ug/l，較1周和2周對(duì)照組的724.01±51.21 ug/l和787.41±45.63 ug/l顯著降低。單

8、因素方差分析LSD檢驗(yàn)比較4組間差異，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5.小鼠肝臟IFN—γ/IL-10比值：1周和2周對(duì)照組的比值均數(shù)分別為3.40和3.49，1周和2周實(shí)驗(yàn)組的比值均數(shù)分別為1.24和0.63，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組顯著降低，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。6.小鼠門靜脈IL-10、TGF—β1與肝臟IFN—γ/IL-10比值的相關(guān)性：線性相關(guān)分析示在1周組和2周實(shí)驗(yàn)組，兩者之間為顯著負(fù)相關(guān)，IL-1

9、0和TGF—β1的相關(guān)系數(shù)R2分別為0.866和0.842(P<0.05)。 結(jié)論：1.荷盲腸腫瘤小鼠的門靜脈IL-10和TGF—β1濃度較正常小鼠升高，且隨腫瘤生長逐漸增高。2.荷盲腸腫瘤小鼠的肝臟IL-10表達(dá)較正常小鼠升高，IFN—γ表達(dá)較正常小鼠降低，出現(xiàn)漂移現(xiàn)象，且隨腫瘤生長漂移越加明顯。3.荷盲腸腫瘤小鼠的肝臟IFN—γ/IL-10比值較正常小鼠降低，且隨腫瘤生長降低更加明顯；門靜脈IL-10和TGF—β1濃度與肝臟