女性SLE患者雌激素受體α基因多態(tài)性與Th1-Th2細(xì)胞因子漂移的相關(guān)性研究.pdf

1、一、目的 通過(guò)對(duì)女性SLE患者進(jìn)行ERα基因多態(tài)性，Th1/Th2細(xì)胞因子mRNA的檢測(cè)，以及對(duì)它們之間相關(guān)性的研究，進(jìn)一步探討女性SLE患者的發(fā)病機(jī)制，為SLE的預(yù)防和治療提供新的思路。 二、方法 提取SLE患者基因組DNA，PCR擴(kuò)增ERα基因片段，分別取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用XbaⅠ和PvuⅡ酶切、電泳，紫外檢測(cè)儀觀察結(jié)果，XbaⅠ酶切后可分為3種基因型：缺乏XbaⅠ酶切位點(diǎn)為XX型，雜合予為Xx型，存在XbaⅠ

2、酶切位點(diǎn)為xx型；PvuⅡ酶切后可分為3種基因型：缺乏PvuⅡ酶切位點(diǎn)為PP型，雜合了為Pp型，存在PvuⅡ酶切位點(diǎn)為pp型。用淋巴細(xì)胞分層液密度梯度離心法常規(guī)分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）。TRIZOL法提取細(xì)胞總RNA，cDNA合成按照逆轉(zhuǎn)錄酶（promege產(chǎn)品）說(shuō)明書(shū)操作合成。應(yīng)用Primer3軟件在線設(shè)計(jì)引物，以β-actin為內(nèi)參照，RT-PCR擴(kuò)增IL-10、IL-4和IFN-γ、IL-2 mRNA。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳后

3、，用TANOIN凝膠掃描儀，以Tanon Gis軟件對(duì)電泳條帶進(jìn)行灰度掃描，并計(jì)算各細(xì)胞因子與β-actin的比值，從而得出各細(xì)胞因子mRNA的相對(duì)含量，并利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得出ERα基因多態(tài)性與各細(xì)胞因子mRNA的關(guān)系。 三、結(jié)果 1．SLE患者與健康對(duì)照組ERα基因XbaⅠ和PvuⅡ酶切位點(diǎn)多態(tài)性之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； 2．PpXx基因SLE患者IL-10和IL-4的表達(dá)比健康對(duì)照組升高，在SLE患者組各基因型之

4、間，PpXx基因型IL-10表達(dá)比PPXX、PPXx、PpXx和ppxx基因型明顯升高，在PpXx基因型IL-4的表達(dá)比PPXX、Ppxx和ppxx基因型表達(dá)升高； 3．Ppxx基因型SLE患者IFN-γ、IL-2表達(dá)比健康對(duì)照組降低，在SLE患者組各基因型之間，Ppxx基因型IFN-γ的表達(dá)比PpXx和ppxx明顯降低，Ppxx基因型IL-2比PPXX、PpXx和ppxx基因型表達(dá)降低； 4．在健康對(duì)照組各基因型之間，