RGD序列肽在口腔癌中的作用機理研究.pdf

1、目的： 1、利用RGDV體外干預入舌鱗狀細胞癌腦轉移亞系Tb細胞系，探討RGDV對Tb細胞系增殖、凋亡的調控作用。 2、利用RGDV對金黃地鼠頰囊癌模型進行靶向治療，探討RGDV在口腔自發(fā)成瘤體系中的作用。 方法： 1、RGDV對舌癌細胞增殖凋亡的研究 (1)通過RGDV作用于Tb細胞，采用MTT比色法、平板克隆形成實驗以及流式細胞儀細胞內抗原檢測法檢測PCNA蛋白的表達，觀察RGDV對Tb細胞增

2、殖的影響。 (2)通過RGDV作用于Tb細胞系，采用FITC-AnnexinV/Pl檢測細胞凋亡、流式細胞儀檢測細胞周期、Hoechst/PI雙染法觀察細胞形態(tài)、電鏡觀察細胞形態(tài)、DNA梯狀電泳以及流式細胞儀細胞內抗原檢測法檢測Caspase-3蛋白的表達，觀察RGDV對Tb細胞凋亡的影影響。 2、RGDV對金黃地鼠頰囊癌靶向治療的研究建立金黃地鼠頰囊癌模型，利用RGDV對金黃地鼠頰囊癌模型進行靶向治療，定期觀察地鼠頰囊

3、癌腫瘤體積變化，治療結束后取頰囊癌組織。常規(guī)包埋、切片,免疫組織化學法檢測治療后組織中v-WF、Brdu的表達變化。統(tǒng)計分析實驗結果。 結果： 1、RGDV對舌癌細胞增殖凋亡的研究 (1)RGDV對Tb細胞增殖的影響：RGDV干預組Tb細胞增殖速度低于Con組，克隆形成率明顯低于Con組(P<0.05)；PCNA表達水平明顯下調。 (2)RGDV對Tb細胞凋亡的影響：RGDV組的凋亡細胞發(fā)生率明顯增加，達

4、到88.3％與Con組相比有顯著性差異(P<4.05)；Tb細胞復制被阻滯在S期；DNA電泳顯示清晰的DNA Ladder：Hoechst/Pl雙染法觀察到明顯的凋亡細胞；Caspase-3蛋白的含量同Con組相比明顯增多。 2、RGDV對金黃地鼠頰囊癌靶向治療的研究 (1)利用RGDV對金黃地鼠頰囊癌模型進行靶向治療后，腫瘤體積的變化結果：RGDV組地鼠腫瘤體積較Con組顯著縮小(P<0.05)。 (2)利用R

5、GDV對金黃地鼠頰囊癌模型進行靶向治療后，v-WF的表達結果：RGDV組和Con組v-WF均有表達，分別檢測MVD(微血管密度)，RGDV組MVD值顯著低于Con組(P<0.05)。 (3)利用RGDV對金黃地鼠頰囊癌模型進行靶向治療后， Brdu的表達結果：RGDV組和Con組Brdu均有表達，分剮檢測PI(增殖指數(shù))，RGDV組PI值顯著低于Con組(P<0.05)。 結論： 1、應用RGDV干預Tb細胞后，

6、Tb細胞的增殖能力降低，提示RGDV抑制了Tb細胞的增殖能力； 2、應用RGDV干預Tb細胞后，可誘導Tb細胞凋亡提示細胞凋亡途徑可能是RGDV影響腫瘤形成的重要途徑，并且RGDV可能通過CaspaSe-3信號通路誘導Tb細胞凋亡； 3、應用RGDV作用金黃地鼠頰囊癌后，抑制了腫瘤細胞的增殖，抑制了腫瘤的生長。 4、應用RGDV作用金黃地鼠頰囊癌后，降低了金黃地鼠頰囊癌的微血管密度，說明RGDV對腫瘤新生血管起抑