α1，3-半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶在口腔癌免疫治療中的基礎(chǔ)研究.pdf

1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文α1，3-半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶在口腔癌免疫治療中的基礎(chǔ)研究姓名：李醫(yī)丹申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：口腔基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：潘巨利20050601案。方法：本研究利用基因重組技術(shù)將鼠源性的Ql ，3 ．半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶的e D N A 序列整合到p B A D ／T O P OT h i o F u s i o n 表達(dá)系統(tǒng)中，并將其轉(zhuǎn)化到L M G l 9 4 菌株中，通過(guò)L - 5 可拉伯糖誘導(dǎo)L M G l 9 4 菌株高

2、效表達(dá)重組Q1 ，3 - 半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶。由于表達(dá)系統(tǒng)中含有( H i s ) 6 t a g 結(jié)構(gòu)，因此，表達(dá)后的融合蛋白經(jīng)N i ”螯合層析純化，便可得到高純度的重組a 1 ，3 ．半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶。隨后，將重組Q1 ，3 ．半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶、神經(jīng)胺酸酶和尿嘧啶二磷酸半乳糖與人口腔鱗癌細(xì)胞株T c a 8 1 1 3 共同培養(yǎng)，固定后，再將其與人血清共同孵育，用帶有異硫氰酸熒光素的羊抗人的免疫球蛋白G ( I g G ) 對(duì)與Q —g

3、a l 表位結(jié)合的人I g G 進(jìn)行標(biāo)記，利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定。結(jié)果：S D S ．P A G E 鑒定，L - 5 可拉伯糖誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化后的L M G l 9 4 菌株全菌裂解液在5 3 K D 處有蛋白高表達(dá)，N i ”螯合層析純化后的酶在5 3 K D處有一明顯的條帶。流式細(xì)胞儀檢測(cè)，經(jīng)重組Q1 , 3 ．半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶處理的實(shí)驗(yàn)組熒光強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組。結(jié)論：本研究充分說(shuō)明將鼠源性的1 ：11 ，3 - 半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶的基

4、因序列引入p B A D ／T O P OT h i o F u s i o n 表達(dá)系統(tǒng)，的確能夠高效表達(dá)重組Q1 ，3 一半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶，且該重組Ⅱ1 ，3 一半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶確實(shí)能夠在人口腔癌細(xì)胞株T c a 8 1 1 3 細(xì)胞膜表面合成a —g a l 表位。經(jīng)重組Q1 , 3 ·半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶處理過(guò)的口腔癌細(xì)胞制各成為自體腫瘤疫苗能夠有效的與人血清中天然的a n t i —G a l 抗體特異性的識(shí)別，并與其結(jié)合形成