α1，3-半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶在口腔癌免疫治療中的基礎(chǔ)研究.pdf

1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文α1，3-半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶在口腔癌免疫治療中的基礎(chǔ)研究姓名：李醫(yī)丹申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：口腔基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：潘巨利20050601案。方法：本研究利用基因重組技術(shù)將鼠源性的Ql ，3 ．半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶的e D N A 序列整合到p B A D ／T O P OT h i o F u s i o n 表達系統(tǒng)中，并將其轉(zhuǎn)化到L M G l 9 4 菌株中，通過L - 5 可拉伯糖誘導(dǎo)L M G l 9 4 菌株高

2、效表達重組Q1 ，3 - 半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶。由于表達系統(tǒng)中含有( H i s ) 6 t a g 結(jié)構(gòu)，因此，表達后的融合蛋白經(jīng)N i ”螯合層析純化，便可得到高純度的重組a 1 ，3 ．半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶。隨后，將重組Q1 ，3 ．半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶、神經(jīng)胺酸酶和尿嘧啶二磷酸半乳糖與人口腔鱗癌細胞株T c a 8 1 1 3 共同培養(yǎng)，固定后，再將其與人血清共同孵育，用帶有異硫氰酸熒光素的羊抗人的免疫球蛋白G ( I g G ) 對與Q —g

3、a l 表位結(jié)合的人I g G 進行標記，利用流式細胞儀進行熒光強度測定。結(jié)果：S D S ．P A G E 鑒定，L - 5 可拉伯糖誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化后的L M G l 9 4 菌株全菌裂解液在5 3 K D 處有蛋白高表達，N i ”螯合層析純化后的酶在5 3 K D處有一明顯的條帶。流式細胞儀檢測，經(jīng)重組Q1 , 3 ．半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶處理的實驗組熒光強度明顯高于對照組。結(jié)論：本研究充分說明將鼠源性的1 ：11 ，3 - 半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶的基

4、因序列引入p B A D ／T O P OT h i o F u s i o n 表達系統(tǒng)，的確能夠高效表達重組Q1 ，3 一半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶，且該重組Ⅱ1 ，3 一半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶確實能夠在人口腔癌細胞株T c a 8 1 1 3 細胞膜表面合成a —g a l 表位。經(jīng)重組Q1 , 3 ·半乳糖苷轉(zhuǎn)移酶處理過的口腔癌細胞制各成為自體腫瘤疫苗能夠有效的與人血清中天然的a n t i —G a l 抗體特異性的識別，并與其結(jié)合形成