漢防己甲素對大鼠先天性膈疝模型胎肺血管VEGF的影響及意義.pdf

1、目的：研究血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在大鼠先天性膈疝(CDH)模型胎肺組織中的表達特點和變化規(guī)律，探索CDH模型肺發(fā)育不良可能的機制以及漢防己甲素(TET)早期干預對胎肺發(fā)育的影響。 材料與方法： 將配種成功后的雌鼠隨機分為三組：正常對照組(組1)；膈疝組(組2)；膈疝漢防己甲素組(組3)。孕9．5天，組2、組3每只孕鼠給予Nitrofen125mg/只(溶于2ml橄欖油中)灌胃1次，組1孕鼠給予等量橄欖油灌胃，孕11

2、天開始，組3孕鼠給予漢防己甲素(Tetrandrine TET)30mg/kg/d(稀釋于2m]生理鹽水中)灌胃，連續(xù)3日，組1、組2孕鼠給予等量的生理鹽水。分別在孕16、18和21天于麻醉下將孕鼠剖腹取胎仔，斷頸處理，光鏡下評估胎肺組織別是血管結(jié)構(gòu)特點，透射電鏡下胎肺超微結(jié)構(gòu)評估，用免疫組化方法檢測第Ⅷ因子(FⅧ)，用原位雜交方法檢測VEGF，并在光鏡下進行組織結(jié)構(gòu)評估和圖像分析，測量結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果： 孕1

3、8及21天時段，組1的胎仔均無膈疝，組2和組3的胎仔膈疝發(fā)生率分別為85％和77％，組2和組3膈疝發(fā)生率無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。光鏡及透射電鏡觀察顯示：在胎肺動態(tài)發(fā)育過程中，與正常對照組相比，膈疝組大鼠肺泡前阻力血管管壁變厚、管徑變小，肺泡內(nèi)微血管數(shù)量減少，呼吸屏障變厚。經(jīng)過TET治療后的膈疝漢防己甲素組較膈疝組好轉(zhuǎn)。免疫組化染色觀察：胎鼠肺組織中FⅧ的陽性表達主要位于血管內(nèi)皮細胞的胞漿內(nèi)。正常對照組內(nèi)，F(xiàn)Ⅷ陽性表達豐富，分布廣泛

4、，而膈疝組內(nèi)其表達明顯減少，經(jīng)TET治療后，膈疝漢防己甲素組內(nèi)FⅧ的表達增加，接近于正常對照組。三組肺內(nèi)FⅧ標記的微血管計數(shù)結(jié)果顯示，膈疝組內(nèi)微血管數(shù)量明顯少于正常對照組和膈疝漢防己甲素組(P<0.05)，而后二者之間無統(tǒng)計學差別(P>0.33)。各相應時間段內(nèi)上述三組內(nèi)VEGFmRNA的總體陽性表達強度相似，無統(tǒng)計學差別(P>0.05)。但三組內(nèi)VEGFmRNA的陽性表達分布區(qū)域有差別。正常對照組內(nèi)VEGFmRNA的陽性表達分布均勻，

5、膈疝組內(nèi)其表達在肺泡前阻力血管區(qū)域增強，在肺泡內(nèi)微血管區(qū)域減弱。經(jīng)過TET治療后的膈疝漢防己甲素組中，VEGFmRNA的陽性分布區(qū)域接近正常對照組。 結(jié)論： 1、Nitrofen誘導的CDH大鼠模型能很好的模擬人體CDH時肺內(nèi)血管的病理變化。且在9.5天時給藥誘導出的CDH模型，形成的膈疝以左側(cè)為主。 2、應用TET進行產(chǎn)前干預能有效減輕CDH大鼠肺泡前動脈的異常肌化，擴大肺泡前動脈的管腔直徑，對終末血管特別是微

6、動脈也有擴張作用；同時還能有效促進CDH大鼠肺內(nèi)血管發(fā)育，直接增加肺內(nèi)血管特別是肺泡內(nèi)血管的數(shù)量，從而增大了CDH大鼠肺循環(huán)血管床面積，起到治療產(chǎn)后PPHN的作用。 3、TET能減少CDH大鼠氣-血交換屏障內(nèi)的細胞外基質(zhì)，使其明顯變薄，從而減小氣體交換的距離，有助于提高氣一血交換的效率，可能對增強產(chǎn)后大鼠肺氣體交換功能、提高其氧飽和度有重要作用。 4、VEGF與CDH時肺血管異常的關系非常復雜，二者間的實際聯(lián)系以及相互作