DIDS對在體大鼠心臟缺血-再灌注損傷引起心肌凋亡的作用與PI3K-Akt分子的調(diào)節(jié).pdf

1、急性心肌梗死是冠心病發(fā)展到嚴重階段的一種類型，由于有效收縮功能的下降和心肌細胞的丟失，導致心源性猝死的發(fā)生和患者生活質(zhì)量的下降，嚴重地危害著人們的健康和生命。因此，如何減少急性心肌梗死的面積，有效改善心臟功能，挽救病人生命顯得尤為重要。治療急性心肌梗死的最有效方法是血供重建，包括溶栓、介入治療或冠狀動脈旁路移植術(shù)等快速恢復(fù)缺血心肌的血流供應(yīng)，來最大限度的挽救受損心肌。然而，恢復(fù)缺血心肌的血流供應(yīng)即再灌注，又可加重缺血心肌的損傷。目前認為

2、細胞凋亡是再灌注損傷發(fā)生的重要機制。研究發(fā)現(xiàn)缺血預(yù)處理和缺血后預(yù)處理能夠抑制心肌細胞凋亡能夠減輕心肌再灌注損傷，減少心律失常的發(fā)生，促進心功能的恢復(fù)。故尋找一種新的抗缺血/再灌注損傷（I/RI）心肌凋亡的藥物和方法，探討其作用與可能的機制具有重要的研究價值。
　　4,4’-二異硫氰基芪-2,2’-二磺酸（DIDS）是一種廣譜的氯離子通道阻斷劑，在我們前期研究表明，其對心肌缺血再灌注（I/R）誘導的心率失常、心肌壞死和心臟功能障礙有

3、著重要的保護作用。那么，其保護機制如何呢？目前并不清楚，這為我們提出了新研究的目的：進一步觀察DIDS對急性（I/RI）心臟的梗死面積(M/I)、心肌細胞凋亡狀況及生存信號PI3K/Akt的影響。
　　研究目的：
　　1．在整體動物心臟I/RI模型上，觀察DIDS對I/RI心肌梗死面積及心肌細胞凋亡的影響。
　　2．觀察I/RI心肌組織中信號分子PI3K/Akt表達及DIDS對其調(diào)節(jié)作用。
　　研究方法：

4、　　1.大鼠心臟I/R梗死模型的制備及實驗分組：常規(guī)制備大鼠心臟I/R梗死模型。健康雄性SD大鼠隨機分為3組，6只/組。I/R組（模型組）：缺血30min/再灌注4h，在再灌注期間經(jīng)股靜脈給予生理鹽水；I/R+DIDS組：模型制作方法同I/R組，在再灌注期間經(jīng)股靜脈給予DIDS（14mg/kg）；LY294002預(yù)處理組：缺血前30min經(jīng)股靜脈給予LY294002（0.3mg/kg），模型制作方法同上組，在再灌注期間經(jīng)股靜脈給予DID

5、S（14mg/kg）。生理鹽水、DIDS和LY294002都經(jīng)程控微量泵給予（4ml/kg/h）。
　　2.心肌MI的測量：Evan`s blue-TTC（2,3,5-Triphenyl-2H-tetrazolium chloride）法測量MI方法。
　　3.心肌細胞凋亡的檢測：TUNEL（Terminal deoxynucleoside transferase mediated dUTP nick end labelli

6、ng）法檢測心肌細胞凋亡。
　　4.信號分子PI3K/Akt的檢測：應(yīng)用Western blot測定Akt的表達。
　　研究結(jié)果：
　　1.與I/R組比較，DIDS組在心肌MI和心肌細胞凋亡指數(shù)顯著低于I/R組，分別為38.8％±7.7％vs54.2％±10.8％(P<0.01，n=6)和8.9％±1.8％vs17.6％±3.5％(P<0.01，n=6)，說明DIDS具有抑制心肌細胞凋亡的發(fā)生，達到減少MI的作用。

7、r>　　2.與I/R模型組比較，DIDS組在心肌組織中磷酸化的Akt表達水平（p-Akt）顯著增加，達2.5倍(P<0.01，n=6)；LY294002預(yù)處理后，LY294002可以完全消除由DIDS引起的梗死面積、凋亡指數(shù)的減小，分別為52.4％±10.4％vs54.2％±10.8％（P>0.05，n=6）、18.7％±3.7％vs17.6％±3.5％（P>0.05，n=6）。同時，Akt表達水平?jīng)]有顯著變化(P>0.05)。