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文檔簡介
1、[目的]
利用溴酸鉀(KBrO3)對OGG1基因敲除(OGG1-/-)和MTH1基因敲除(MTH1-/-)小鼠進行染毒,檢測小鼠肝、腎組織中OGG1和MTH1基因的mRNA的表達狀況和8-oxoG的含量,探討OGG1和MTH1基因在小鼠氧化損傷中的作用及可能存在的相互關(guān)系。
[方法]
本研究選取了C57BL/6J小鼠,由日本九州大學(xué)生體防御醫(yī)學(xué)研究所構(gòu)建并提供OGG1和MTH1基因敲除小鼠,以野生型C57B
2、L/6J小鼠作為對照,共有野生型小鼠60只(均為雄性)、MTH1基因敲除型小鼠69只(雄性49只,雌性20只)和OGG1基因敲除型小鼠72只(雄性42只,雌性30只)分別隨機分成3組,以KBrO3為受試毒物,設(shè)0.00%為對照組(A組)和兩個染毒濃度組分別為0.10%、0.20%(B組、C組),四個觀察時間點:2天、7天、14天、28天,觀察小鼠肝、腎組織OGG1、MTH1 mRNA的表達與8-oxoG的積累量。
[結(jié)果]
3、r> 1.小鼠基因型的鑒定
MTH1+/-小鼠DNA所在泳道在749bp和812bp位置各出現(xiàn)一條明顯條帶,MTH1-/+小鼠DNA所在泳道只在749bp出現(xiàn)一條明顯條帶,MTH1-/-小鼠DNA所在泳道只在812bp位置出現(xiàn)一條明顯條帶;OGG1+/-小鼠DNA所在泳道在675bp和786bp位置各出現(xiàn)一條明顯條帶,OGG1+/+小鼠DNA所在泳道只在675bp出現(xiàn)一條明顯條帶,OGG1-/-小鼠DNA所在泳道只在786b
4、p位置出現(xiàn)一條明顯條帶。
2.檢測小鼠肝、腎組織OGG1和MTH1基因mRNA的表達水平
2.1小鼠肝組織MTH1與OGG1的mRNA的表達
2.1.1小鼠肝組織MTH1 mRNA的表達
OGG1-/-小鼠與相應(yīng)野生型小鼠,A、B、C3組肝組織MTH1的mRNA相對表達量隨著觀察時間增加呈增加趨勢,其中第28天MTH1 mRNA相對表達均達到最高值,且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05).
(1
5、)A組相應(yīng)野生型小鼠第2天、第14天和第28天的MTH1 mRNA相對表達量均高于OGG1-/-小鼠,第7天的低于OGG1-/-小鼠,其中第2天和第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
(2)B組各觀察時間點OGG1-/-小鼠MTH1的mRNA相對表達量均高于相應(yīng)野生型小鼠,其中第2天和第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
(3)C組OGG1-/-小鼠第2天、第7天和第14夭MTH1的mRNA相對表達量均高于相
6、應(yīng)野生型小鼠,第28天的低于相應(yīng)野生型小鼠,其中第2天和第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
2.1.2小鼠肝組織OGG1 mRNA的表達
MTH1-/-小鼠及相應(yīng)野生型小鼠,A、B、C3組肝組織OGG1的mRNA相對表達隨著觀察時間增加呈增加趨勢,其中第28天OGG1 mRNA相對表達均達到最高值,且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。
(1)A組相應(yīng)野生型小鼠第2天、第7天和第14天OGG1的mRNA相對
7、表達量均高于MTH1-/-小鼠,第28天的接近MTH1-/-小鼠,其中第2天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
(2)B組MTH1-/-小鼠第2天、第7天和第14天的OGG1的mRNA相對表達量均低于相應(yīng)野生型小鼠,第28天的高于相應(yīng)野生型小鼠,其中第28天有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
(3)C組MTH1-/-小鼠第2天和第7天的OGG1的mRNA相對表達量均低于相應(yīng)野生型小鼠,第14天的高于相應(yīng)野生型小鼠,第28天
8、的接近相應(yīng)野生型小鼠,其中第2天和14天有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
2.2小鼠腎組織MTH1與OGG1的mRNA的表達
2.2.1小鼠腎組織MTH1 mRNA的表達
OGG1-/-小鼠及相應(yīng)野生型小鼠,A、B、C3組腎組織MTH1的mRNA相對表達隨著觀察時間增加呈增加趨勢,其中第28天MTH1的mRNA相對表達均達到最高值且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);3組相應(yīng)野生型小鼠的MTH1 mRNA相對表達量
9、均高于OGG1-/-小鼠,其中第2天和第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
2.2.2小鼠腎組織OGG1 mRNA的表達
MTH1-/-小鼠及相應(yīng)野生型小鼠,A、B、C3組腎組織OGG1的mRNA相對表達隨著觀察時間增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢,其中第14天的OGG1mRNA的相對表達量均達到最高值且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。
(1)A組各相應(yīng)野生型小鼠觀察時間的OGG1 mRNA相對表達量均高于MT
10、H1-/-小鼠,其中第2天和14天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
(2)B組MTH1-/-小鼠第2天和第14天的OGG1 mRNA相對表達量均高于相應(yīng)野生型小鼠,第7天和第28天的均低于相應(yīng)野生型小鼠,其中第14天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
(3)C組MTH1-/-小鼠第2天、第14天和第28天的OGG1 mRNA相對表達量均高于相應(yīng)野生型小鼠,第7天的低于相應(yīng)野生型小鼠,其中第2天、第14天和第28天的有統(tǒng)
11、計學(xué)意義(P<0.05)。
3經(jīng)KBrO3染毒后肝、腎組織DNA中8-oxoG的含量檢測結(jié)果
3.1小鼠肝組織DNA中8-oxoG的含量檢測結(jié)果
3.1.1 A組OGG1-/-小鼠和MTH1-/-小鼠肝組織8-oxoG的含量隨著時間增加呈現(xiàn)下降趨勢;野生型小鼠肝組織8-oxoG含量第2天、第7天和第14天均低于OGG1-/-小鼠和MTH1-/-小鼠,第28天高于OGG1-/-小鼠和MTH1-/-小鼠,其中第
12、2天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
3.1.2 B組三型小鼠肝組織8-oxoG的含量隨著觀察時間增加呈現(xiàn)先升高后下降趨勢,第7天均達到最高值,且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);MTH1-/-小鼠肝組織8-oxoG的含量在各觀察時間段均高于OGG1-/-小鼠,其中第2天、第7天和第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);OGG1-/-小鼠肝組織8-oxoG的含量在各觀察時間段均高于野生型,其中第2天、第7天、第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義
13、(P<0.05)。
3.1.3 C組MTH1-/-小鼠肝組織8-oxoG的含量隨著時間增加呈現(xiàn)下降趨勢;OGG1-/-小鼠肝組織8-oxoG的含量第2天和第28天的低于MTH1-/-小鼠,第7天的高于MTH1-/-小鼠,第14天的接近MTH1-/-小鼠,其中第2天和第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
3.2小鼠腎組織DNA中8-oxoG的含量檢測結(jié)果
OGG1-/-小鼠腎組織DNA中8-oxoG的含量
14、在各觀察點均低于野生型小鼠,其中A組和B組第2天和第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),C組第2天和第14天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
3.2.1 A組野生型小鼠腎組織DNA中8-oxoG的含量在各觀察點均高于OGG1-/-小鼠,其中第2天和第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);OGG1-/-小鼠第2天、第7天和第28天的8-oxoG的含量均低于MTH1-/-小鼠,第14天的高于MTH1-/-小鼠,其中第2天、第7天
15、和第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
3.2.2 B組野生型小鼠腎組織DNA中8-oxoG的含量第2天、第7天和第14天的均高于OGG1-/-小鼠和MTH1-/-小鼠,第28天低于MTH1-/-小鼠,高于OGG1-/-小鼠,其中第2天、第7天和第14天有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);OGG1-/-小鼠第2天、第7天和第28天的8-oxoG含量均低于MTH1-/-小鼠,第14天的接近MTH1-/-小鼠,其中第2天、第7天和第
16、14天有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
3.2.3 C組OGG1-/-小鼠腎組織DNA中8-oxoG的含量第2天、第7天和第28天均低于MTH1-/-小鼠,第14天的接近MTH1-/-小鼠,其中其中第7天和第28天的有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
[結(jié)論]
1.在肝組織中OGG1和MTH1基因的表達可能具有聯(lián)合作用,而且該關(guān)系可能與8-oxoG在機體內(nèi)積累的程度相關(guān)。
2.MTH1蛋白單獨作用于8-
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