體外藥動(dòng)-藥效聯(lián)合模型中鹽酸沃尼妙林對金黃色葡萄球菌的作用研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌是重要的機(jī)會性致病菌，常引起化膿性疾病和人與動(dòng)物的毒素休克綜合癥等，危害很大。現(xiàn)有資料表明，該菌是容易對抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性的細(xì)菌之一，且耐藥問題日漸嚴(yán)重。耐藥性問題不斷加劇，而新型抗茵藥物問世卻日益減少，如何合理優(yōu)化應(yīng)用現(xiàn)有抗菌藥物對抗微生物感染已成為當(dāng)務(wù)之急。藥動(dòng)/藥效聯(lián)合模型(PK/PD)將藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)結(jié)合起來，測定血藥濃度-時(shí)間-效應(yīng)數(shù)據(jù)，可以擬合出藥物濃度及其效應(yīng)的經(jīng)時(shí)曲線，能夠優(yōu)化給藥方案，使抗菌藥物在提高藥效

2、的同時(shí)，較好地控制耐藥性的發(fā)生、發(fā)展。鹽酸沃尼妙林是近年來獲準(zhǔn)上市的二類新獸藥，抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)，可有效控制革蘭氏陽性菌、支原體和螺旋體等感染，具有廣闊應(yīng)用前景。目前，鹽酸沃尼妙林在國內(nèi)外的研究主要集中在藥效和殘留方面，其藥動(dòng)/藥效聯(lián)合模型的研究未見報(bào)道。本文通過體外藥動(dòng)/藥效模型研究了鹽酸沃尼妙林對金黃色葡萄球菌的作用，主要有以下內(nèi)容:
　　1.微量稀釋法測定了LB培養(yǎng)基中鹽酸沃尼妙林對金黃色葡萄球菌ATCC25923的最低

3、抑菌濃度為0.125μg/ml，說明金黃色葡萄球菌對鹽酸沃尼妙林比較敏感。
　　2.使用液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)定量檢測LB培養(yǎng)基中鹽酸沃尼妙林。取500μl樣品加入500μ l乙腈后12000r/min離心30 min，吸取樣品500μ l通過0.22μm濾膜過濾除菌后進(jìn)入LC-MS系統(tǒng)分析。液相工作條件為:流動(dòng)相A:甲酸(0.1％)水溶液;流動(dòng)相B:乙腈;梯度洗脫。流速為0.2 ml/min，柱溫35℃C，進(jìn)樣量為10μl。質(zhì)

4、譜工作條件:電噴霧離子源(ESI)，正離子掃描，多反應(yīng)檢測模式(MRM)，電噴霧電壓(IS)5500V，霧化氣壓力(GS1)50 psi，輔助氣流速(GS2)35 L/min，氣簾氣壓力(CUR)20 psi，離子源溫度(TEM)600℃，碰撞室壓力(CAD)4 psi，用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m/z565.3-＞263.1: CE（碰撞能量）22，CXP（碰撞室出口電壓）23; m/z565.3-＞164.0: CE（碰撞能量）4

5、5，CXP（碰撞室出口電壓）21。經(jīng)測定得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y=3E+08x-282147(R2=0.9999)，在LB培養(yǎng)基中鹽酸沃尼妙林的濃度在0.001～0.25μ g/ml范圍內(nèi)線性相關(guān)，回收率為87.33～94.83％，批內(nèi)變異系數(shù)為1.534、1.690、2.039％，批間變異系數(shù)為2.135％。
　　3.建立了鹽酸沃尼妙林對金黃色葡萄球菌的體外PK/PD模型。取滅菌干燥的400ml玻璃密閉容器，加入200ml的LB培養(yǎng)

6、基，再加入一定量的鹽酸沃尼妙林(1024μg/ml)和對數(shù)期的金黃色葡萄球菌菌液。藥物濃度的減少通過兩個(gè)恒流蠕動(dòng)泵完成，其中一個(gè)蠕動(dòng)泵向密閉容器泵入滅菌LB，另一個(gè)蠕動(dòng)泵從容器底部泵出LB，為防止泵出細(xì)菌，底部為可換膜濾器（濾膜直徑5cm，孔徑0.45μm），調(diào)節(jié)蠕動(dòng)泵使模型t1/2β（消除半衰期）為2h、3h。經(jīng)3p97軟件分析表明，模型的藥動(dòng)學(xué)符合靜脈注射的一室模型，r2=0.997±0.002，平均t1/2β（消除半衰期）分別為2

7、.04±0.10、2.96±0.12h。
　　4.通過模型模擬了鹽酸沃尼妙林在豬體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)過程，通過定時(shí)檢測模型內(nèi)的細(xì)菌數(shù)量來考察鹽酸沃尼妙林的藥效，研究藥動(dòng)/藥效關(guān)系。結(jié)果顯示，在半衰期為2h時(shí)，2MIC(T＞MIC為1.89±0.06h)、4MIC(T＞MIC為3.82±0.15h)的鹽酸沃尼妙林能分別抑制金葡菌2h、4h;8 MIC(T＞MIC為6.33±0.24h)、16MIC(T＞MIC為8.42±0.25h)的鹽

8、酸沃尼妙林能對細(xì)菌起到持續(xù)抑制作用。在半衰期為3h時(shí)，2 MIC的鹽酸沃尼妙林能在3h內(nèi)抑制金葡菌;4 MIC(T＞MIC為6.35±0.19h)、8MIC(T＞MIC為8.63±0.27h)、16MIC(T＞MIC為11.55±0.46h)能對細(xì)菌起到持續(xù)抑制作用。由此推測，鹽酸沃尼妙林對金黃色葡萄球菌的抗菌作用具有時(shí)間依賴的特點(diǎn)，完全殺滅的必要條件是T＞MIC時(shí)間在6h以上。
　　本研究表明，要使鹽酸沃尼妙林對金黃色葡萄球菌發(fā)