納米羥基磷灰石對肝癌細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的抑制作用.pdf

1、納米羥基磷灰石(nHAP)具有顯著的體外抗肝癌細(xì)胞作用，而對肝細(xì)胞的抑制作用不明顯。納米羥基磷灰石的這種抗肝癌作用，為抗肝癌醫(yī)學(xué)研究提供了一條新的途徑。目前已知其主要作用機(jī)理是通過調(diào)節(jié)c-myc、p53的基因表達(dá)，使肝癌細(xì)胞阻止于G1期，激活caspase-9誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞非凋亡性程序性死亡。為了進(jìn)一步探究納米羥基磷灰石抑癌作用的機(jī)理，本文主要通過研究納米羥基磷灰石對肝癌細(xì)胞蛋白合成的影響來探究其抑制肝癌細(xì)胞增殖的機(jī)理。
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2、用人肝癌細(xì)胞系Bel-7402和人肝細(xì)胞系L02，用不同濃度的同種納米羥基磷灰石進(jìn)行不同時間處理，然后通過MTT比色法測定其對兩種細(xì)胞的增殖抑制率。結(jié)果表明，在一定處理濃度和時間范圍內(nèi)，納米羥基磷灰石對L02細(xì)胞影響很小的情況下，對Bel-7402細(xì)胞的增殖產(chǎn)生明顯抑制作用，起到抑制肝癌細(xì)胞增長的作用。
　　 通過用Eu標(biāo)記的納米羥基磷灰石Eu-nHAP處理Bel-7402細(xì)胞和L02細(xì)胞，然后用DAPI作為細(xì)胞核特異熒光探針對

3、兩種細(xì)胞的細(xì)胞核染色，用DiOC6(3)作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異熒光探針對兩種細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色，最后再在激光共聚焦顯微鏡下觀察到經(jīng)熒光探針標(biāo)記的Bel-7402細(xì)胞和L02細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)Eu-nHAP處于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。說明納米羥基磷灰石進(jìn)入細(xì)胞后的作用靶點(diǎn)為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，并可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，影響細(xì)胞蛋白的合成、分泌、空間折疊、蛋白質(zhì)糖基化修飾等功能。
　　 用含有3H-Leucine的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)經(jīng)納米羥基磷灰石處理過的細(xì)胞，然后經(jīng)液體閃爍計數(shù)器檢測

4、細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的速率。結(jié)果表明，經(jīng)納米羥基磷灰石處理后的細(xì)胞，總蛋白質(zhì)的合成速率均有不同程度減緩。在小于0.7mg/ml的濃度范圍內(nèi)，處理3天的納米羥基磷灰石明顯抑制了Bel-7402細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，而L02細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成受到的影響卻不大，L02細(xì)胞仍然維持著正常的合成蛋白的功能。這說明納米羥基磷灰石通過破壞Bel-7402細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成功能，抑制肝癌細(xì)胞增長。
　　 用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記轉(zhuǎn)鐵蛋白制成Fe-Tf

5、FITC，并與納米羥基磷灰石處理過的Bel-7402細(xì)胞，L02細(xì)胞共孵育，利用熒光光度計檢測兩種細(xì)胞轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的含量。結(jié)果表明，經(jīng)納米羥基磷灰石處理的Bel-7402細(xì)胞轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的含量明顯減少，L02細(xì)胞轉(zhuǎn)鐵蛋白受體含量幾乎沒有影響。這表明納米羥基磷灰石進(jìn)入肝癌細(xì)胞后通過抑制轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達(dá)，降低鐵進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量，來抑制核糖核苷酸還原酶的活性，阻礙DNA的合成，將無限增殖的肝癌細(xì)胞阻滯于G1期，起到抑制肝癌細(xì)胞生長和增殖的作用