河南漢族人群血小板膜糖蛋白IaC807T基因多態(tài)性與缺血性腦血管病關(guān)系的相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的:
　　 腦血管病(cerebrovascular disease，CVD)是嚴(yán)重威脅我們?nèi)祟惤】档某Ｒ姴?、多發(fā)病，且其發(fā)病率、致殘率、復(fù)發(fā)率、及死亡率逐年升高，給個(gè)人、家庭及社會(huì)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)及心理負(fù)擔(dān)。目前，腦血管病的大量危險(xiǎn)因素已被確定，如高血壓、高血糖、血脂異常及吸煙等，然而在腦血管病中大約80％是缺血性腦血管病(ischemic cerebrovascular disease，ICVD)，至今其發(fā)病機(jī)制尚未完

2、全明了。我國(guó)屬于腦血管病的高發(fā)國(guó)家，并且發(fā)病越來越呈年輕化趨勢(shì)。現(xiàn)階段對(duì)ICVD危險(xiǎn)因素的研究已經(jīng)成為腦血管病防治的重要領(lǐng)域，近年來，分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，為腦血管病的遺傳學(xué)研究開辟了新領(lǐng)域，ICVD的研究已進(jìn)入分子水平。當(dāng)前，醫(yī)學(xué)界應(yīng)當(dāng)努力發(fā)現(xiàn)和鑒別ICVD的致病基因，健全預(yù)測(cè)ICVD發(fā)生的手段，盡早識(shí)別ICVD的高危人群，進(jìn)而為ICVD患者提供更積極的防治策略。
　　 膠原在凝血和血栓形成過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，它能與活化的血小

3、板結(jié)合并使之粘附于暴露的血管內(nèi)皮下。血小板膜糖蛋白(Glycoprotein，GP)基因多態(tài)性是血栓形成的危險(xiǎn)因素，它通過其表面的膜糖蛋白受體GPIa(glycoprotein Ia，GPIa)復(fù)合物與膠原結(jié)合，產(chǎn)生有力的信號(hào)導(dǎo)致血小板的激活和聚集，最終導(dǎo)致血栓形成。近年來，在血小板膜GPIa基因編碼序列中807(C或T)和873(G或A)位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)兩種多態(tài)性，且等位基因807T和873A是完全連鎖的，而后發(fā)現(xiàn)這兩種多態(tài)性和血小板膜GPI

4、a分子在血小板的表面水平明顯相關(guān)，因此推測(cè)血小板膜GPIa基因多態(tài)性可能是血栓性疾病的遺傳易感因素。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于血小板膜GPIaC807T基因多態(tài)性與ICVD相關(guān)性的研究結(jié)論不一，且較少大樣本實(shí)驗(yàn)。因此，研究血小板膜GPIaC807T基因多態(tài)性與ICVD的相關(guān)性對(duì)腦血管病的防治有重要意義。本試驗(yàn)通過分析ICVD患者和對(duì)照組GPIaC807T基因的多態(tài)性，了解其在中國(guó)河南地區(qū)漢族人群中的分布特點(diǎn)進(jìn)而明確其與ICVD的關(guān)系，旨在從遺傳學(xué)方

5、面探討河南漢族人群ICVD的病因，從分子水平揭示其發(fā)病機(jī)制，探討該多態(tài)性是否是我省ICVD發(fā)生的遺傳風(fēng)險(xiǎn)因子，便于及早發(fā)現(xiàn)ICVD的危險(xiǎn)人群，從而為ICVD的防治提供更多的基礎(chǔ)理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 選取2008年9月～2009年6月河南省內(nèi)二級(jí)甲等以上醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院患者317例，男171例，女146例，年齡38～75歲，平均年齡(56.5±18.5)，所有病人均行頭顱CT或MRIi正實(shí)。病例的診斷依據(jù)2006

6、年WHO確定的關(guān)于缺血性腦卒中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有的入選患者歸為腦梗死組；根據(jù)發(fā)病年齡，把腦梗死組中≤55歲的患者歸為年齡≤55歲腦梗死組；依據(jù)Essen卒中危險(xiǎn)評(píng)分(ESRS)及美國(guó)的Framingham卒中風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估(FSP)標(biāo)準(zhǔn)，將腦梗死組中有高發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者歸為高危腦梗死組。并隨機(jī)選取同期311例無心腦血管疾病家族史的健康體檢者作對(duì)照，男性165例，女性146例，年齡39～76歲，平均年齡(57.5±18.5)。全部受試者均為河南漢族人

7、，飲食結(jié)構(gòu)相似，各研究對(duì)象之間無血緣關(guān)系，兩組間在年齡、性別、血壓、血脂、血糖及吸煙等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。所有研究對(duì)象均除外腫瘤、靜脈血栓形成、肝腎功能不全、接受器官移植及嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良等疾病者。
　　 所有研究對(duì)象取晨空腹外周靜脈抗凝血3ml，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的酚-氯仿法提取白細(xì)胞基因組DNA。設(shè)計(jì)引物，采用PCR-RFLP(聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性)技術(shù)擴(kuò)增目的片段及酶切產(chǎn)物，在2.5％的瓊脂糖溴化乙

8、錠凝膠中電泳，紫外凝膠成像儀上檢測(cè)結(jié)果并拍照進(jìn)行分析。
　　 所有試驗(yàn)結(jié)果均在SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包中建立數(shù)據(jù)庫(kù)，基因型和等位基因頻率采用頻率計(jì)數(shù)法計(jì)算，組間的基因型頻率、等位基因頻率分布分析及Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)的差異用x2檢驗(yàn)，病例組和對(duì)照組間的基因型及等位基因相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)率用比數(shù)比(Odds Ratios，OR)及95％可信區(qū)間表示。以α=0.05作為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果:
　　

9、 1.中國(guó)河南漢族人群血小板膜GPIa基因編碼序列中第807位存在兩種等位基因(C或T)和三種基因型(CC，CT及TT)。
　　 2.病例組和對(duì)照組人群的基因型分布經(jīng)x2檢驗(yàn)均符合Hardy-weinberg平衡，P＞0.05，具有人群代表性。
　　 3.T等位基因頻率及TT基因型頻率在對(duì)照組與腦梗死組間分布差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05；兩者在年齡≤55歲腦梗死組與對(duì)照組間及高危腦梗死組和對(duì)照組間的頻率分布差異具有