河南漢族人群肺結(jié)核與CCL5基因多態(tài)性相關(guān)性分析.pdf

1、背景和目的
　　 肺結(jié)核(pulmonary tuberculosis,TB)是一種由結(jié)核桿菌導(dǎo)致的高度傳染性疾病。篩選肺結(jié)核易感基因,并確定相關(guān)基因在結(jié)核病發(fā)病中的作用,對(duì)闡明結(jié)核病的發(fā)病遺傳基礎(chǔ)和分子機(jī)制,從遺傳和基因角度針對(duì)性地采取預(yù)防措施,開發(fā)研制基因疫苗和治療藥物奠定基礎(chǔ)。近年來,隨著分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展,尤其是人類基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展,宿主易感基因在肺結(jié)核病發(fā)生發(fā)展中的作用越來越受到重視。
　　 趨化因

2、子是一類小分子分泌性蛋白質(zhì)。可受化學(xué)誘導(dǎo)物及細(xì)胞因子調(diào)節(jié),刺激炎性細(xì)胞產(chǎn)生趨化運(yùn)動(dòng)。其中趨化因子5(CC chemokine ligand5,CCL5)(CCL5)主要作用是誘導(dǎo)、激活和輔助其他細(xì)胞因子共同刺激T細(xì)胞和單核細(xì)胞,導(dǎo)致白細(xì)胞介素-2受體的表達(dá),細(xì)胞因子釋放和T細(xì)胞增殖,在免疫調(diào)節(jié)和炎癥過程中起著重要作用。因此,CCL5基因在病理過程中的作用受到越來越廣泛的關(guān)注。生化代謝和免疫學(xué)等研究發(fā)現(xiàn),結(jié)核分枝桿菌感染的巨噬細(xì)胞內(nèi)趨化因

3、子5的表達(dá)水平發(fā)生改變,并與TB發(fā)生密切相關(guān)。但目前CCL5基因與肺結(jié)核相關(guān)報(bào)道極少且結(jié)論不一,國內(nèi)尚未見相關(guān)報(bào)道。
　　 本文采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR—RFLP)技術(shù),觀察CCL5啟動(dòng)子區(qū)域rs2280788:-28C／G和rs2107538:-403G／A兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性(single nucleofide polymorphisms,SNP)位點(diǎn)在中國河南漢族人群中的分布情況,同時(shí)進(jìn)行TB危險(xiǎn)因素分

4、析,旨在探討CCL5啟動(dòng)子區(qū)域兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性在TB發(fā)生過程中的作用,為TB發(fā)病機(jī)制研究提供資料。
　　 方法
　　 患者組241例,納入標(biāo)準(zhǔn)均符合中華人民共和國衛(wèi)生部通告[2008]2號(hào)文件的WS288-2008肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組選取270例同期健康體檢的隨機(jī)個(gè)體。2組間性別、年齡匹配,均排除糖尿病、HIV感染、使用腎上腺皮質(zhì)激素及其它免疫抑制劑等。
　　 所有研究對(duì)象取外周靜脈血2ml,2％EDTA抗凝

5、,標(biāo)準(zhǔn)酚-氯仿法提取基因組DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)一限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)擴(kuò)增目的片段并用HincⅡ和RsaⅠ酶切擴(kuò)增產(chǎn)物,2.5％的瓊脂糖凝膠電泳,在紫外成像儀上檢測(cè)分析結(jié)果。
　　 以基因計(jì)數(shù)法計(jì)算TB患者與正常人群的基因型,用Hardy—Weinberg平衡及相關(guān)性檢驗(yàn)評(píng)估標(biāo)本群體代表性。應(yīng)用SPSS17.0軟件包作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:x2檢驗(yàn)TB病組與正常人群之間基因型和等位基因頻率差異,計(jì)算比值比(Odds Ratio,OR

6、)及95％可信區(qū)間(CI),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果
　　 1.在河南漢族人群中,CCL5基因rs2280788多態(tài)性分布在TB組與對(duì)照組相比無顯著差異(P>0.05)。
　　 2.在河南漢族人群中,CCL5基因rs2107538多態(tài)性分布在TB組與對(duì)照組相比,AA、AG、GG三種基因型和G、A等位基因頻率均具有顯著性差異(P<0.05)。
　　 3.對(duì)rs2107538位點(diǎn)和rs2280788

7、位點(diǎn)進(jìn)行單體型分析,。單體型分析發(fā)現(xiàn)C-A明顯高于對(duì)照組(P<0.05),G-A低于對(duì)照組(P<0.05)。
　　 4.對(duì)rs2107538位點(diǎn)基因型和rs2280788位點(diǎn)基因型進(jìn)行聯(lián)合分析,CC／AG低于對(duì)照組(P<0.05),GC／AA、GC／AA、GC／GG、CC／AA高于對(duì)照組(P<0.05)。
　　 5.CCL5基因rs2107538位點(diǎn)和rs2280788位點(diǎn)多態(tài)性的分布與西班牙相似,與中國香港存在顯著差異