人神經系統(tǒng)特異表達基因BRI-,3-編碼蛋白的初步功能研究.pdf

1、BRI<,3>(Brain Protein I3)作為BRI基因家族的一個成員,屬于Ⅱ型單跨膜蛋白,只有一個跨膜區(qū),N端較短,C端較長.生物信息學軟件分析結果:N端在胞內,C端在胞外;沒有任何明顯的定位信號和功能結構域.Northern雜交結果顯示,該基因主要在腦表達.為了進一步了解BRI<,3>基因在腦組織中的表達分布情況,該文克隆了hBRI<,3>的小鼠同源基因(mBRI<,3>),以3'非編碼區(qū)的一段序列為模板設計并轉錄了原位雜交

2、探針.用小、大鼠的中樞神經系統(tǒng)切片和小鼠整體胚胎進行原位雜交,研究小鼠的mBRI<,3>mRNA在中樞神經系統(tǒng)組織和細胞中的分布.實驗結果顯示,mBRI<,3>mRNA在大腦皮層、海馬、蒲根野細胞層、橋腦面神經核、顳葉皮層以及脊髓前角神經元中高表達.為進一步了解hBRI<,3>蛋白的亞細胞定位,該文構建了真核表達載體pEGFP-N1-BRI<,3>(綠色熒光蛋白融合表達質粒),轉染SH-SY5Y細胞.利用共聚焦顯微鏡進行觀察發(fā)現(xiàn),熒光信

3、號主要存在于細胞核周圍并呈斑塊狀分布.該文選擇hBRI<,3>蛋白特異性較好的N端作為"誘餌"蛋白,利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選人胎腦cDNA文庫中可能與之相互作用的蛋白質.SCG10蛋白作為stathmin蛋白家族的一個成員,具有抑制微管組裝,促進微管去組裝的功能,對神經元細胞的軸突生長具有明顯的促進作用.在闡明BRI<,3>和SCG10蛋白之間存在相互作用的基礎上,我們進一步研究了BRI<,3>蛋白對SCG10蛋白引起的微管解聚過程的影響