海南砂仁揮發(fā)油對實驗性潰瘍性結(jié)腸炎的作用及其安全性評價.pdf

1、目的：探討海南砂仁揮發(fā)油（volatile oil from A.longiligulare T.L.Wu，VOA）對實驗性潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）的作用及作用機制，并對其進行安全性評價。 方法：（1）水蒸氣法提取VOA，采用氣相色譜法分析其化學(xué)成分，研究其可控性及穩(wěn)定性；（2）采用小鼠Bliss法，對VOA進行急性毒性研究，測定其LD50；（3）采用自由飲用4％葡聚糖硫酸鈉（dextran s

2、ulfate sodium，DSS）水溶液制備UC小鼠模型，以柳氮磺胺吡啶（sulfasalazine，SASP）作對照，觀察VOA對UC小鼠臨床癥狀及結(jié)腸粘膜病理改變的影響；（4）采用2，4-二硝基氯苯（2，4-dinitrobenzene-1-chlorobenzene，DNCB）與乙酸復(fù)合灌腸法制備UC大鼠模型，以SASP作對照，觀察VOA對UC大鼠結(jié)腸組織大體形態(tài)及病理學(xué)改變的影響；（5）觀察不同劑量的VOA對二甲苯致小鼠耳腫脹

3、和角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響，對小鼠熱板法痛閾值和冰醋酸所致小鼠扭體次數(shù)的影響以及對番瀉葉和蓖麻油所致小鼠腹瀉的影響；（6）生化法檢測DSS誘導(dǎo)的UC小鼠結(jié)腸組織中一氧化氮（nitric oxide，NO）、丙二醛（maleic dialdehyde，MDA）含量及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力，探討VOA治療UC的機制；（7）生化法檢測DNCB與乙酸誘導(dǎo)的UC大鼠結(jié)腸組織中SOD、谷胱苷肽過氧

4、化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力及一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）含量，探討VOA治療UC的機制；（8）采用免疫組化法考察VOA對DSS誘導(dǎo)的UC小鼠結(jié)腸組織誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）和細胞間粘附分子-1（intercellular adhesion molecule1，ICAM-1）表達的影響；

5、（9）采用免疫組化法考察VOA對DNCB與乙酸誘導(dǎo)的UC大鼠結(jié)腸組織腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和核因子-κBp65（nuclear factor-κBp65，NF-κBp65）表達的影響；（10）觀察不同劑量的VOA對Sprague-Dawley大鼠連續(xù)灌胃90d，恢復(fù)期觀察15d，期間測量大鼠體重、血液學(xué)和血液生化指標，計算臟器系數(shù)，并進行病理學(xué)檢查。 結(jié)果：（1）VOA成分

6、穩(wěn)定，質(zhì)量可控；（2）VOA灌胃給藥，小鼠的LD50為7.3009g/kg；（3）VOA給藥明顯改善DSS誘導(dǎo)的UC小鼠臨床癥狀，減輕結(jié)腸粘膜病理損傷；（4）VOA給藥明顯減輕DNCB與乙酸誘導(dǎo)的UC大鼠結(jié)腸粘膜組織大體形態(tài)及病理學(xué)損傷；（5）VOA對二甲苯致小鼠耳腫脹和角叉菜膠所致大鼠足腫脹均有抑制作用，其中高劑量組作用與吲哚美辛相當(dāng)。VOA對熱致痛小鼠可延長其痛閾時間，高劑量組較為明顯；對醋酸致痛小鼠，各劑量組可減少其扭體次數(shù)，但其

7、作用無顯著性差異。VOA對番瀉葉所致腹瀉有效，對蓖麻油所致腹瀉無效；（6）VOA能明顯降低DSS誘導(dǎo)的UC小鼠結(jié)腸組織中NO及MDA含量，顯著升高SOD活力；（7）VOA能明顯降低DNCB與乙酸誘導(dǎo)的UC大鼠結(jié)腸組織中NOS的含量，顯著升高SOD及GSH-Px活力；（8）VOA可明顯抑制DSS誘導(dǎo)的UC小鼠結(jié)腸組織iNOS和ICAM-1陽性細胞表達率；（9）VOA可明顯抑制DNCB與乙酸誘導(dǎo)的UC大鼠結(jié)腸組織TNF-α和NF-κBp65

8、陽性細胞表達率；（10）VOA各劑量組大鼠的一般情況、血液學(xué)和血液生化學(xué)指標均未見明顯差異，各給藥組動物體重較對照組有顯著差異，病理學(xué)及臟器檢查顯示脾和肺出現(xiàn)病理改變。 結(jié)論：（1）VOA具有較好的抗UC作用和抗炎鎮(zhèn)痛止瀉作用，并且毒性很低，質(zhì)量可控，提示VOA可作為一種有效的UC防治藥物。（2）通過對VOA抗實驗性UC機制的初步研究，發(fā)現(xiàn)其抗UC作用的機制可能與下列因素有關(guān)：①減少自由基生成、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)；②調(diào)節(jié)結(jié)腸組織