補(bǔ)腎通脈方對(duì)伴胰島素抵抗的多囊卵巢綜合征大鼠胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.pdf

1、本研究分為四部分：
　　 第一部分：補(bǔ)腎通脈方對(duì)伴胰島素抵抗的多囊卵巢大鼠胰島素抵抗及排卵障礙的影響
　　 目的：皮下注射脫氫表雄酮(DHEA)聯(lián)合高脂高卡飲食喂養(yǎng)，建立一種新的胰島素抵抗(insulin resistance，IR)的多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)大鼠模型。并觀察補(bǔ)腎通脈方對(duì)PCOS大鼠的影響。
　　 方法：23日齡雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉

2、睪酮鈉9mg·100g-1·d-1共20天，聯(lián)合高脂高熱卡飲食喂養(yǎng)80天建立伴IR的PCOS大鼠模型。成模大鼠隨機(jī)分為模型組和中藥組，另設(shè)13只正常組。中藥組大鼠以補(bǔ)腎通脈方干預(yù)。HE染色觀察各組大鼠卵巢形態(tài)學(xué)變化，葡萄糖氧化酶法測定空腹血糖(FBG)，放射免疫法測定血清空腹胰島素(Fins)、睪酮(T)、雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(ISI)和LH/FSH。
　　 結(jié)果：與正常組

3、比較，模型組大鼠卵巢呈多囊樣改變，平均排卵數(shù)及排卵率、ISI、FSH明顯降低(P＜0.05，P<0.01)，F(xiàn)BG、Fins和T、E2、LH、LH/FSH濃度顯著升高(P＜0.05，P<0.01)。與模型組比較，中藥組大鼠卵巢卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞層數(shù)明顯增加，平均排卵數(shù)及排卵率、ISI、FSH均明顯增加(P＜0.01)，F(xiàn)ins、T和E2、LH/FSH顯著降低(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：皮下注射DHEA聯(lián)合高脂高卡飲食，可成功誘導(dǎo)

4、IR的PCOS大鼠模型。補(bǔ)腎通脈方可改善PCOS大鼠的胰島素抵抗及排卵障礙。
　　 第二部分：補(bǔ)腎通脈方對(duì)伴胰島素抵抗多囊卵巢綜合征大鼠胰島素受體表達(dá)的影響
　　 目的：觀察補(bǔ)腎通脈方對(duì)伴IR的PCOS大鼠胰島素靶器官中胰島素受體(insulin receptor，InsR)表達(dá)的影響，探討補(bǔ)腎通脈方改善伴IR的PCOS的機(jī)制。
　　 方法：23日齡雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睪酮鈉9mg·100g-1·d-1共

5、20天，聯(lián)合高脂飲食喂養(yǎng)80天建立伴IR的PCOS大鼠模型。成模大鼠隨機(jī)分為模型組和中藥組，另設(shè)13只正常組。中藥組大鼠以補(bǔ)腎通脈方干預(yù)。各組大鼠于動(dòng)情后期，在門靜脈推注胰島素前后各處死一半。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測各組大鼠肝臟、脂肪、骨骼肌組織InsR mRNA表達(dá)，免疫組化檢測卵巢組織InsR蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：模型組InsR在肝臟、骨骼肌和脂肪組織中mRNA及卵巢中蛋白表達(dá)，均明顯低于正常組(P<0.0

6、5)，中藥組均顯著高于模型組(P<0.05)。胰島素刺激后，各組肝臟、脂肪、骨骼肌組織中InsR mRNA及卵巢中蛋白表達(dá)，均較刺激前明顯增多(P<0.05)。
　　 結(jié)論：補(bǔ)腎通脈方可改善伴IR的PCOS，其機(jī)制可能與提高胰島素靶組織InsR的表達(dá)，改善胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等環(huán)節(jié)有關(guān)。
　　 第三部分：補(bǔ)腎通脈方對(duì)伴胰島素抵抗多囊卵巢綜合征大鼠胰島素受體底物-1表達(dá)的影響
　　 目的：觀察補(bǔ)腎通脈方對(duì)伴IR的PCOS

7、大鼠胰島素靶器官中胰島素受體底物-1(insulin receptor substrate-1，IRS-1)表達(dá)的影響，探討補(bǔ)腎通脈方改善伴IR的PCOS的機(jī)制。
　　 方法：23日齡雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睪酮鈉9mg·100g-1·d-1共20天，聯(lián)合高脂飲食喂養(yǎng)80天建立伴IR的PCOS大鼠模型。成模大鼠隨機(jī)分為模型組和中藥組，另設(shè)13只正常組。中藥組大鼠以補(bǔ)腎通脈方干預(yù)。各組大鼠于動(dòng)情后期，在門靜脈推注胰島素前后各處

8、死一半。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測各組大鼠肝臟、脂肪、骨骼肌IRS-1 mRNA表達(dá)，免疫印跡法(Western blot)檢測各組大鼠肝臟、脂肪中IRS-1蛋白表達(dá)，免疫組化檢測卵巢IRS-1蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：模型組IRS-1在肝臟、脂肪、骨骼肌中mRNA、蛋白表達(dá)，及卵巢中蛋白表達(dá)，均明顯低于正常組(P<0.05，P<0.01)，中藥組均顯著高于模型組(P<0.05)。各組IRS-1在胰島素刺激后的表達(dá)均

9、較刺激前明顯增多(P<0.05)。
　　 結(jié)論：補(bǔ)腎通脈方可改善伴IR的PCOS，其機(jī)制可能與提高胰島素靶組織IRS-1的表達(dá)，改善胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等環(huán)節(jié)有關(guān)。
　　 第四部分：補(bǔ)腎通脈方對(duì)伴胰島素抵抗多囊卵巢綜合征大鼠胰島素受體底物-1絲氨酸307磷酸化表達(dá)的影響
　　 目的：觀察補(bǔ)腎通脈方對(duì)伴IR的PCOS大鼠胰島素靶器官中胰島素受體底物-1絲氨酸307(insulin receptor substrate-1

10、 Ser307，IRS-1 Ser307)磷酸化表達(dá)的影響，探討補(bǔ)腎通脈方改善伴IR的PCOS的機(jī)制。
　　 方法：23日齡雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睪酮鈉9mg·100g-1·d-1共20天，聯(lián)合高脂飲食喂養(yǎng)80天建立伴IR的PCOS大鼠模型。成模大鼠隨機(jī)分為模型組和中藥組，另設(shè)13只正常組。中藥組大鼠以補(bǔ)腎通脈方干預(yù)。各組大鼠于動(dòng)情后期，在門靜脈推注胰島素前及后各處死一半。免疫印跡法(Western blot)檢測各組大鼠

11、肝臟、脂肪IRS-1 Ser307蛋白表達(dá)，免疫組化檢測卵巢IRS-1 Ser307蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：模型組IRS-1 Ser307磷酸化蛋白在肝臟、脂肪、卵巢中表達(dá)均明顯高于正常組(P<0.05，P<0.01)，中藥組均顯著低于模型組(P<0.05，P<0.01)。胰島素刺激后各組IRS-1 Ser307均較刺激前明顯減少(P<0.05)。
　　 結(jié)論：補(bǔ)腎通脈方可改善伴IR的PCOS，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)胰島素靶組