以嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化為靶標(biāo)篩選柴胡活性成分.pdf

1、柴胡(Bupleurem)為傘形科植物，主產(chǎn)于遼寧、甘肅、河北、陜西等地。為我國(guó)傳統(tǒng)中藥，藥用歷史悠久，始載于神農(nóng)本草經(jīng)，列為上品，其性味苦辛、微寒、歸肝、膽經(jīng)，具有透表退熱、疏肝解郁、及升舉陽(yáng)氣等功效。主治感冒發(fā)熱，寒熱往來及胸脅苦滿等疾病。 現(xiàn)代醫(yī)藥研究發(fā)現(xiàn)柴胡藥理作用廣泛，而且不良反應(yīng)少。柴胡皂苷為柴胡主要活性成分，具有解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、抗驚厥、和抗腫瘤等作用。 細(xì)胞的異常分化是腫瘤的基本特征之一，分化誘導(dǎo)劑可

2、將腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)重新向正常細(xì)胞的方向演變分化。其基本特點(diǎn)在于不是殺傷腫瘤細(xì)胞，而是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化為正?；蚪咏＜?xì)胞。由于具有選擇性強(qiáng)，不良作用小，并可與其他治療方法相結(jié)合等優(yōu)點(diǎn)，分化誘導(dǎo)劑作為腫瘤治療的一種新途徑已成為腫瘤研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)。林明棟發(fā)現(xiàn)[28]，柴胡甲醇提取物有激活腺苷酸環(huán)化酶(AC)的作用，表明柴胡中可能存在產(chǎn)生誘導(dǎo)分化的成分。本研究在林明棟啟示下，欲從柴胡根部尋找能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化的活性成分，為研究新的抗腫瘤藥物發(fā)

3、現(xiàn)先導(dǎo)化合物。我們以嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞PC12的誘導(dǎo)分化為生物活性指標(biāo)，應(yīng)用現(xiàn)代分離、分析方法對(duì)柴胡根部提取物進(jìn)行分組，篩選有效成分、分離純化和分子結(jié)構(gòu)解析。 采用甲醇對(duì)柴胡根部粉碎物進(jìn)行溶劑提取，提取液低溫濃縮，濃縮粗提物分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行分配分組。通過觀察在含有提取成分或分離組分的培養(yǎng)基中PC12細(xì)胞是否發(fā)生分化作為活性指標(biāo)，篩選活性成分并對(duì)其分離方法進(jìn)行優(yōu)化和監(jiān)測(cè)。用硅膠和SephadexLH-20凝膠柱色譜對(duì)

4、活性組分進(jìn)行層析分離，以不同極性的混合溶劑梯度洗脫，通過反復(fù)多次的層析分離得到具有生物活性化合物。利用紅外光譜、1H-核磁共振譜、13C-核磁共振譜和質(zhì)譜等多種波譜技術(shù)對(duì)化合物進(jìn)行分子結(jié)構(gòu)解析。 我們從柴胡乙醇提取物中分離純化到7個(gè)化合物，從乙酸乙酯組分得到5個(gè)化合物，分別是6"-O-乙酰柴胡皂苷a、3"-O-乙酰柴胡皂苷d、柴胡皂苷b2、α-菠甾醇-β-D葡萄糖、α-菠甾醇。從正丁醇組分得到2個(gè)化合物，分別是柴胡皂苷d、柴胡皂

5、苷b4。其中2個(gè)有誘導(dǎo)分化活性，分別是3"-O-乙酰柴胡皂苷d、6"-O-乙酰柴胡皂苷a，這兩個(gè)化合物對(duì)PC12細(xì)胞有明顯的分化作用，呈現(xiàn)時(shí)間，劑量效應(yīng)關(guān)系。其中6"-O-乙酰柴胡皂苷a在劑量2μg/ml，1.5小時(shí)之后開始起效，呈現(xiàn)非常明顯的分化作用；3"-O-乙酰柴胡皂苷d在10μg/ml時(shí)1.5小時(shí)起效維持到4.5小時(shí)后作用微弱。我們通過MTT實(shí)驗(yàn)考察了活性餾分W1-15(含6"-O-乙酰柴胡皂苷a，3"-O-乙酰柴胡皂苷d)對(duì)P

6、C12細(xì)胞增殖抑制的影響，在給藥劑量5μg/ml≤W1-15≤20μg/ml時(shí)，OD(570nm)值明顯低于正常對(duì)照組，還原MTT能力下降，細(xì)胞抑制率隨劑量增加而增大，表明W1-15對(duì)PC12細(xì)胞有增殖抑制作用，且呈一定的劑量效應(yīng)。 本研究首次發(fā)現(xiàn)化合物6"-O-乙酰柴胡皂苷a、3"-O-乙酰柴胡皂苷d可誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化。我們認(rèn)為用硅膠和SephadexLH-20凝膠柱層析色譜分離純化柴胡皂苷是有效可行的方法。證明通過PC1