嗜鉻細胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤microRNAs研究.pdf

1、第一部分，嗜鉻細胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤腫瘤組織中miR-483-5p.miR-183、miR-21、miR-210的研究
　　 目的：
　　 良、惡性嗜鉻細胞瘤/副神經(jīng)節(jié)瘤(PCC/PGL)的鑒別診斷仍是難點，有必要尋找新的生物標志物鑒別PCC/PGL的良、惡性。microRNA(miRNAs)在多種腫瘤中異常表達，參與腫瘤的發(fā)病機制。許多研究表明miRNAs可作為腫瘤鑒別診斷、預后預測的生物標志物。本研究擬檢測miR-483

2、-5p、miR-183、miR-210和miR-21四種miRNA在PCC/PGL中的表達，分析其與臨床特征之間的關系。
　　 方法：
　　 1、用Trizol法分別提取PCC(n=32)、PGL(n=24)腫瘤組織和正常腎上腺髓質(n=6)的總RNA，分別用miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21莖環(huán)逆轉錄引物進行miRNA逆轉錄獲得micDNA，用SYBRGreen染料法進行實時定量PCR檢

3、測不同組織中miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21的相對表達量。
　　 2、分析miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21的表達與PCC/PGL臨床特征的關系。
　　 結果：
　　 1、miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21在惡性PCC/PGL患者腫瘤組織中表達均分別高于良性PCC/PGL(P＜0.05);后兩者與正常腎上腺髓質之間差

4、異無統(tǒng)計學意義；
　　 2、miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21在惡性PCC與PGL、良性PCC與PGL之間差異無統(tǒng)計學意義；
　　 3、miR-483-5p、miR-210和miR-21在惡性PCC腫瘤組織中的表達均高于正常腎上腺髓質(P＜0.05)；
　　 4、miR-483-5p、miR-210在惡性PGL腫瘤組織中的表達均高于正常腎上腺髓質(P＜0.05);miR-21在惡性

5、PGL腫瘤組織中的表達有高于正常腎上腺髓質的趨勢(p=0.077)
　　 5、VHL病PCC組織中miR-483-5p、miR-183、miR-210、miR-21的表達
　　 1)VHL病患者PCC組織中僅miR-210表達高于惡性PCC(P＜0.05)，而miR-483-5p、miR-183、miR-21的表達水平與惡性PCC差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 2)VHL病患者PCC組織的miR-483

6、-5p、miR-183、miR-210、miR-21表達均高于良性PCC(P＜0.05)
　　 6、miR-483-5p、miR-183、miR-210、miR-21的表達與PCC/PGL患者臨床特征的關系
　　 1)miR-21表達在多發(fā)腫瘤中高于單發(fā)者(P＜0.01)，而miR-483-5p、miR-183、miR-210的表達在兩者間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 2)miR-483-5p、miR

7、-183、miR-210、miR-21在患者性別、年齡及不同腫瘤部位、大小、Ki-67％水平等臨床特征之間比較均未見統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 結論：
　　 1、miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21在惡性PCC/PGL組織中的高表達，對鑒別良、惡性腫瘤可能有一定意義;而僅有miR-483-5p、miR-183、miR-210和miR-21高表達而無臨床惡性證據(jù)者需密切隨訪。
　

8、　 2、miR-483-5p、miR-183、miR-210、miR-21在VHL病的PCC腫瘤組織中呈高表達，其臨床意義有待進一步研究。
　　 第二部分，嗜鉻細胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤患者血清中miR-483-5p、m1R-21、miR-210的研究
　　 目的：
　　 第一部分的結果表明惡性嗜鉻細胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤(PCC/PGL)組織中miR-483-5p、miR-21和miR-210的表達較良性者明顯升高。本部分

9、擬檢測PCC/PGL患者血清中miR-483-5p、miR-21和miR-210的表達情況，探討miR-483-5p、miR-21和miR-210在PCC/PGL患者血清與腫瘤組織中表達的相關性及手術治療前后血清中的表達變化。
　　 方法：
　　 1、用MaxRecoveryTMBiooPureTMRNAIsolationReagent分別提取PCC(n=9)，PGL(n=13)術前、術后血清的總RNA，分別用miR-4

10、83-5p、miR-210和miR-21莖環(huán)引物進行逆轉錄獲得micDNA，用SYBRGreen染料法進行實時定量PCR檢測血清中miR-483-5p、miR-210和miR-21的相對表達量。2、分析腫瘤組織和血清中miR-483-5p、miR-210和miR-21表達的相關性。3、比較PCC/PGL患者術前與術后血清中miR-483-5p、miR-210和miR-21的表達差異。
　　 結果：
　　 1、PCC/PG

11、L患者血清中能檢測到miR-483-5p、miR-210和miR-21的表達。
　　 2、血清與組織中miR-483-5p、miR-210和miR-21水平未見明顯相關。
　　 3、miR-483-5p、miR-21表達水平在PCC/PGL患者術后血清均下降(P＜0.05)，miR-210有下降的趨勢(P=0.082)。
　　 結論：
　　 1、PCC/PGL患者血清中能檢測到miR-483-5p、miR

12、-210和miR-21的表達
　　 2、手術治療后PCC/PGL血清中miR-483-5p、miR-210和miR-21表達水平較術前不同程度下降，提示上述miRNAs可能對術后監(jiān)測有一定意義。
　　 第三部分，PCC/PGL腫瘤組織中HIF-1α、HIF-2α、SDHD、SDHB、PTENmRNA的表達與miR-21、miR-210的關系
　　 目的：
　　 以低氧誘導因子(HIF)活化為中心的PI3K

13、/PTEN/ARK/HIF信號通路在PCC/PGL的發(fā)病機制中起重要作用。miR-210受缺氧誘導產(chǎn)生，靶向調節(jié)SDHD基因的表達。miR-21處于缺氧活化的上游通路中，靶向調節(jié)PTEN基因表達。本部分擬檢測PCC/PGL組織中HIF-1α、HIF-2α、SDHD、SDHB及PTEN的mRNA水平，探討miR-210、miR-21與HIF表達之間的關系，miR-210與SDH、miR-21與PTEN表達之間的關系。
　　 方法：

14、
　　 1、用Trizol法分別提取PCC(n=32)、PGL(n=24)腫瘤組織和正常腎上腺髓質(n=6)的總RNA，經(jīng)Oligo(dT)18逆轉錄為cDNA，用SYBRGreen染料法進行實時定量PCR檢測上述標本中HIF-1α、HIF-2α、SDHD、SDHB和PTEN的相對表達量。
　　 2、分析腫瘤組織中HIF-1α、HIF-2α、SDHD、SDHB和PTENmRNA表達水平與腫瘤良惡性的關系。
　　

15、3、分析腫瘤組織中HIF-1α、HIF-2αmRNA與miR-210、miR-21，SDHD、SDHBmRNA與miR-210，PTENmRNA與miR-21之間的關系。
　　 結果：
　　 1、HIF-1α、HIF-2α、SDHD、SDHB和PTENmRNA表達水平與腫瘤良惡性的關系
　　 1)HIF-1αmRNA在惡性PGL腫瘤組織中的表達有高于良性PCC/PGL、正常腎上腺髓質的趨勢（P值分別為0.063，

16、0.055，0.090）。良性PCC和PGL腫瘤組織中HIF-1αmRNA表達與正常腎上腺髓質之間差異無統(tǒng)計學意義。
　　 2)SDHBmRNA在惡性PGL/PCC、良性PGL中的表達低于正常腎上腺髓質(P均＜0.05)，SDHDmRNA在良性PGL、惡性PCC的表達低于正常腎上腺髓質（P均＜0.05）。
　　 3)HIF-2α、PTENmRNA在良、惡性PCC，良、惡性PGL和正常腎上腺髓質之間的表達差異無統(tǒng)計學意義。

17、
　　 2、mRNA與miRNA的表達
　　 1)miR-21、miR-210表達水平與HIF-1αmRNA水平呈正相關，相關系數(shù)分別為0.335(P=0.013)和0.466(P＜0.001)
　　 2)miR-21、miR-210表達水平與HIF-2αmRNA水平之間未見明顯相關，p值分別為0.116，0.076。
　　 3)miR-210表達水平與SDHB、SDHDmRNA水平之間未見明顯相關，p值

18、分別為0.400，0.184。
　　 4)miR-21表達水平與PTENmRNA水平之間未見明顯相關（P=0.141）。
　　 結論：
　　 1、miR-21、miR-210表達水平與HIF-1αmRNA相關，與HIF-2αmRNA未見明顯相關。miR-21與PTENmRNA未見明顯相關。miR-210與SDHB、SDHDmRNA未見明顯相關。
　　 2、HIF-1αmRNA表達在惡性PGL患者腫瘤組織中