SDHB和EPAS1與嗜鉻細(xì)胞瘤-副神經(jīng)節(jié)瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的微陣列研究.pdf

1、目的:嗜鉻細(xì)胞瘤(PHEO)和副神經(jīng)節(jié)瘤(PGL)是腎上腺髓質(zhì)和腹部、胸部、頭和頸部神經(jīng)節(jié)來(lái)源的腫瘤。功能(分泌兒茶酚胺)和非功能的病例中基因突變者約占30％。除RET、VHL,和NF-1外,編碼琥珀酸脫氫酶復(fù)合體亞單位的核基因SDHB、SDHC、SDHD和SDHAF2也認(rèn)為是PHEO/PGL的易感基因。約15％的PHEO/PGL,患者通過(guò)SDHB、SDHC和SDHD基因的突變,引起遺傳性嗜鉻細(xì)胞瘤/副神經(jīng)節(jié)瘤綜合征(HPPS),但基因

2、突變引起相關(guān)蛋白表達(dá)與嗜鉻細(xì)胞瘤副神經(jīng)節(jié)瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的機(jī)制不明確。本研究旨在探討SDHB突變和EPAS1的過(guò)度表達(dá)與PHEO/PGL浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的關(guān)系,并確定基因突變、EPAS1、IGF-1和MIB-1作為預(yù)測(cè)臨床上惡性病變的指標(biāo)的意義。
　　 材料和方法:
　　 1.對(duì)43例PHEO/PGL患者進(jìn)行了SDH,VHL和RET等胚系突變基因的分析。與臨床特點(diǎn)包括性別、年齡、腫瘤部位和多發(fā)病變等結(jié)果行相關(guān)分析。對(duì)SDHB基因(1

3、q36.1-1q35,外顯子1～8),SDHC基因(1q21,外顯子1～5),SDHD基因(11q23,外顯子1～4),SDHAF2基因(11q12.2,外顯子1～4),RET原癌基因(10q11.2,外顯子10,11,13,14及15和16),和VHL基因(3p25.3,外顯子1～3)等直接進(jìn)行DNA的序列分析,同時(shí)檢測(cè)PHEO/PGL的外周血樣本琥珀酸脫氫酶B啟動(dòng)子區(qū)的甲基化程度。
　　 2.對(duì)64例PHEO/PGL組織標(biāo)本

4、的石蠟切片行SDHB、EPAS1、VEGF-1R、CgA和MIB-1的免疫組化染色。將陽(yáng)性確定為顆粒狀細(xì)胞質(zhì)染色,計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野,200個(gè)細(xì)胞/視野,共計(jì)1000個(gè),>50％為強(qiáng)陽(yáng)性(+++),11％～50％為中度陽(yáng)性(++),弱陽(yáng)性為細(xì)胞質(zhì)彌漫輕染且缺乏明確的陽(yáng)性顆粒,陰性則是與已知的陽(yáng)性內(nèi)參比較,完全沒(méi)有染色。
　　 3.既往研究中顯示活化的胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅰ受體(IGF-IR)可產(chǎn)生很強(qiáng)的神經(jīng)保護(hù)作用的,我們研究了IGF

5、-Ⅰ誘導(dǎo)大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞分化和增殖的能力,將PC12細(xì)胞置于重組人IGF-1環(huán)境中,觀察IGF-1對(duì)PC12細(xì)胞增殖和分化的刺激和兒茶酚胺釋放的調(diào)節(jié)。
　　 結(jié)果:
　　 1.基因突變17例(17.5％,17/97)。最常見(jiàn)的是RET原癌基因突變(8.24％,8/97),7名患者SDHB基因突變(7.2％,7/97),有2例’VHL基因突變(2.06％,2/97)。有或無(wú)突變兩個(gè)組的臨床特點(diǎn)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性

6、差異。
　　 2.EPAS1在正常腎上腺髓質(zhì)呈陰性染色,在良性嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤中度陽(yáng)性表達(dá),在惡性副神經(jīng)節(jié)瘤中高表達(dá)。17例已知VHL、RET和SDHB突變的腫瘤15例呈陽(yáng)性染色。一例VHL病相關(guān)嗜鉻細(xì)胞瘤染色呈弱陽(yáng)性。無(wú)胚系基因突變的46個(gè)腫瘤標(biāo)本,13例陽(yáng)性。一個(gè)臨床特征符合家族性副神經(jīng)節(jié)瘤但沒(méi)有SDH基因突變的標(biāo)本,免疫組化為陰性,另外1例呈微弱彌漫染色。此外通過(guò)相關(guān)性分析,EPAS1陽(yáng)性表達(dá)與CgA、MIB-1、V

7、EGF-1R以及CD34密切相關(guān)。
　　 3.IGF-1影響PC-12細(xì)胞增殖分化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與添加去甲腎上腺素(NE)相比,重組人IGF-1通過(guò)激活不同的信號(hào)通路,協(xié)同增加大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤:PC12細(xì)胞增殖生長(zhǎng)效率,且與所給的劑量和時(shí)間長(zhǎng)短相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 我們的研究表明:
　　 (1)基因遺傳易感性在嗜鉻組織腫瘤中頻率較高,約7.2％的副神經(jīng)節(jié)瘤與SDHB的胚系基因突變相關(guān),而且SDHB的