疏水性膽汁酸致新生鼠肝線(xiàn)粒體活性氧產(chǎn)生與膜通透性轉(zhuǎn)換的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：在膽汁淤積性肝病中，疏水性膽汁酸在肝臟內(nèi)的蓄積被認(rèn)為能導(dǎo)致肝細(xì)胞毒性作用。疏水性膽汁酸通過(guò)致肝線(xiàn)粒體活性氧(ROS)產(chǎn)生和膜通透性轉(zhuǎn)換(MPT)引發(fā)線(xiàn)粒體功能紊亂，誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡、壞死產(chǎn)生毒性作用。本文通過(guò)建立疏水性膽汁酸致新鮮離體新生鼠肝線(xiàn)粒體損傷的模型，探討疏水性膽汁酸致新生鼠肝線(xiàn)粒體活性氧產(chǎn)生和膜通透性轉(zhuǎn)換的具體機(jī)制，并進(jìn)一步證明抗氧化和抗MPT處理的臨床價(jià)值。 方法：取健康6天齡近交系Wistar大鼠新生鼠，每十只

2、作為一測(cè)量單位。采用乙醚麻醉后，剖腹取肝，收集十只肝臟稱(chēng)重后勻漿，采用差速和密度梯度法分離提純線(xiàn)粒體。于線(xiàn)粒體懸液中加入不同濃度的甘氨鵝脫氧膽酸(GCDC)，預(yù)先加入和不加入MPT抑制劑-環(huán)孢菌素A及三種抗氧化劑(褪黑素、β-胡羅卜素和α-生育酚)，用分光光度計(jì)連續(xù)測(cè)量MPT 5分鐘，觀察膽汁酸濃度對(duì)MPT的影響，并比較不同預(yù)處理后MPT的改變值。電鏡觀察線(xiàn)粒體超微結(jié)構(gòu)的改變。用流式細(xì)胞儀測(cè)定加入GCDC后1，3，5，10分鐘時(shí)線(xiàn)粒體R

3、OS的產(chǎn)生量。觀察膽汁酸濃度對(duì)ROS產(chǎn)生的影響，比較不同預(yù)處理后ROS的增加量。測(cè)量指標(biāo)均取三次測(cè)量單位結(jié)果的平均值。 結(jié)果：線(xiàn)粒體內(nèi)活性氧產(chǎn)生和膜通透性轉(zhuǎn)換與加入膽汁酸的濃度及處理時(shí)間呈依賴(lài)關(guān)系：隨濃度的升高，時(shí)間的延長(zhǎng)，線(xiàn)粒體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生量和膜通透性均增高，電鏡結(jié)果顯示加入膽汁酸后線(xiàn)粒體超微結(jié)構(gòu)的破壞較對(duì)照組明顯；抗MPT組線(xiàn)粒體膜通透性轉(zhuǎn)換明顯抑制，活性氧產(chǎn)生較對(duì)照組明顯降低，電鏡結(jié)果顯示抗MPT組較對(duì)照組及抗氧化組線(xiàn)粒

4、體超微結(jié)構(gòu)破壞明顯改善；抗氧化組線(xiàn)粒體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生較對(duì)照組明顯減少，膜通透性轉(zhuǎn)換較對(duì)照組明顯抑制，電鏡結(jié)果顯示抗氧化組較對(duì)照組線(xiàn)粒體超微結(jié)構(gòu)破壞明顯改善。 結(jié)論：1．離體的新生鼠肝線(xiàn)粒體經(jīng)疏水性膽汁酸處理后，能迅速發(fā)生膜通透性轉(zhuǎn)換、活性氧產(chǎn)生和線(xiàn)粒體形態(tài)學(xué)的改變，這些改變同膽汁酸的濃度及處理時(shí)間呈劑量、時(shí)間依賴(lài)關(guān)系。 2．疏水性膽汁酸處理新生鼠肝線(xiàn)粒體后，線(xiàn)粒體活性氧產(chǎn)生與膜通透性轉(zhuǎn)換呈正相關(guān)。 3．抗氧化及