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1、 目的:通過(guò)研究20種唾液酸糖基轉(zhuǎn)移酶(sialyltransferase,ST)基因在三對(duì)人急性髓性白血病(acute myeloid leukemia, AML) 細(xì)胞株及AML患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中的差異表達(dá),明確這些ST基因與人AML多藥耐藥的相關(guān)性,從而為預(yù)測(cè)和診斷AML多藥耐藥性,尋求逆轉(zhuǎn)藥物提供新策略和靶點(diǎn)。
方法:
(1) 采用質(zhì)譜分析技術(shù)檢測(cè)人 AML 細(xì)胞株 HL60 及其耐阿霉素細(xì)胞株H
2、L60/ADR細(xì)胞表面N-糖鏈的組成差異。
(2) 采用real-time PCR技術(shù)檢測(cè)三對(duì)人AML細(xì)胞株及AML患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中的ST基因表達(dá)情況,篩選出差異表達(dá)3倍以上的ST基因。
(3) 特異性下調(diào)、上調(diào)差異表達(dá)的ST基因,檢測(cè)干擾、過(guò)表達(dá)前后HL60/ADR、HL60細(xì)胞在體內(nèi)、外對(duì)化療藥物敏感性的變化、PI3K/Akt信號(hào)通路的激活情況及P-gp、MRP1的表達(dá)情況。
(4) 特
3、異性PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002和Akt siRNA分別作用于HL60/ADR細(xì)胞,檢測(cè)抑制前后HL60/ADR細(xì)胞在體內(nèi)、外對(duì)化療藥物敏感性的變化。
結(jié)果:
(1) HL60和HL60/ADR細(xì)胞膜表面N-糖鏈的組成具有顯著差異。
(2) 7種ST基因在三對(duì)人AML細(xì)胞株及AML患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中表達(dá)具有顯著差異。
(3) 特異性下調(diào)HL60/ADR細(xì)胞中ST
4、8SIA4、上調(diào)HL60/ADR細(xì)胞中ST3GAL5時(shí),該細(xì)胞的藥物敏感性增強(qiáng),PI3K/Akt信號(hào)通路分子、P-gp、MRP1表達(dá)降低(P﹤0.05);特異性下調(diào)HL60細(xì)胞中ST3GAL5、上調(diào)HL60細(xì)胞中ST8SIA4時(shí),該細(xì)胞的藥物敏感性減弱,PI3K/Akt信號(hào)通路分子、P-gp、MRP1表達(dá)增高(P﹤0.05)。
(4) HL60/ADR細(xì)胞經(jīng)LY294002和Akt siRNA分別作用后,PI3K/Akt主
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