HPS血清13、14型TbpA蛋白對豚鼠的交互免疫保護(hù)性研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis，HPS)可引起以神經(jīng)癥狀、漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、體溫升高和呼吸困難為主要臨診癥狀的副豬嗜血桿菌病，該病呈世界性分布，是重要的細(xì)菌性傳染病。由于獸醫(yī)臨床上抗生素的長期不合理使用，導(dǎo)致HPS耐藥性日益增強(qiáng)。因此，疫苗使用成為預(yù)防副豬嗜血桿菌病最為有效的方法之一。然而，HPS具有明顯的地方性特征，而且不同血清型菌株之間的交互保護(hù)率很低，現(xiàn)有的商品化疫苗免疫預(yù)防也不能針對所有的血清型菌株。所以研

2、究具有良好交互免疫保護(hù)力的新型疫苗意義顯著。
　　本實(shí)驗(yàn)室在前期進(jìn)行的豚鼠免疫攻毒試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)HPS血清型13型轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白A(Tbp A)不僅對同血清型菌株產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)，還可對血清型4型提供一定的交互保護(hù)力。但HPS其他血清型的TbpA能否產(chǎn)生免疫保護(hù)和交互免疫保護(hù)力尚不清楚。本研究系利用HPS血清型13和14型表達(dá)的重組TbpA免疫豚鼠，通過檢測免疫后豚鼠血清中IgG抗體水平和細(xì)胞因子（腫瘤壞死因子TNF-α，干擾素IF

3、N-γ，白細(xì)胞介素IL-2、IL-5、IL-8，趨化因子MCP-1）水平，觀察攻毒后豚鼠的采食量、精神狀態(tài)和死亡率，剖檢病變及其病理組織學(xué)變化，探究HPS不同血清型的TbpA對豚鼠的免疫保護(hù)和交互免疫保護(hù)作用，從而為進(jìn)一步在本動物（仔豬）上開展相關(guān)研究提供依據(jù)。
　　首先，采用累積法(Reed-Muench)測定HPS血清型13和14型對HPS抗體陰性豚鼠的半數(shù)致死量(LD50)。其次，篩選54只健康的40日齡HPS抗體陰性豚鼠，

4、每組隨機(jī)分配6只，共9組;A1、A2組以50μg/只免疫血清型13型TbpA;B1、B2組以50μg/只免疫血清型14型TbpA;C1、C2組以200L/只注射PBS作為攻毒對照組;A3、B3、C3組以200μL/只注射PBS作為空白對照。采用弗氏佐劑，背部皮下多點(diǎn)注射，免疫2次，第2次免疫量為100μg/只，免疫間隔時間20d。每次免疫后10d心臟采血分離血清，檢測血清中抗體和細(xì)胞因子含量。在第2次免疫后21d，A1、B1、C1以HP

5、S血清型13型1×LD100劑量攻毒，A2、B2、C2以血清型14型1×LD100劑量攻毒，A1、B1、C1注射等量PBS，統(tǒng)計免疫保護(hù)率，剖檢豚鼠，制作病理組織切片觀察比較病理變化。
　　結(jié)果顯示，豚鼠在免疫HPS血清型13、14型TbpA后，血清中抗體水平均有所升高，二免后均上升顯著，但兩者之間差異不顯著;除MCP-1與IL-2外，4種細(xì)胞因子水平在2次免疫后均顯著上升，且2次免疫之間差異顯著，但免疫13型和14型TbpA組之

6、間差異不顯著;13型TbpA免疫組對同血清型和不同血清型HPS的攻毒保護(hù)率為83.3％和50％;14型TbpA免疫組對同血清型和不同血清型HPS的攻毒保護(hù)率為66.7％和33.3％;免疫攻毒組存活豚鼠和空白對照組豚鼠均未見明顯病變和及組織學(xué)變化，而死亡豚鼠肺臟出血、壞死，肝臟表面纖維素性滲出，胸腔、腹腔積液，胸腔粘連，腦出血，肺臟、脾臟、肝臟均有少量炎性細(xì)胞浸潤或輕微出血;攻毒對照組豚鼠肺臟出血、壞死，肝臟表面纖維素性滲出，胸腔粘連，胸