脂多糖預(yù)處理減輕大鼠胰腺缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過建立穩(wěn)定的大鼠胰腺缺血再灌注模型，并應(yīng)用脂多糖(LPS)預(yù)處理，探討脂多糖預(yù)處理對大鼠胰腺缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。 方法:建立穩(wěn)定的大鼠胰腺缺血再灌注模型。雄性SD大鼠54只，隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組(sham組，n=6)、缺血再灌注組(I/R組，n=24)和LPS預(yù)處理組(LPS組，n=24)，后兩組又各分為1h組、3h組、6h組和12h組4個亞組，每組6只。LPS組首次經(jīng)腹腔注射LPS 0.25m

2、g/kg，第二天再經(jīng)腹腔注射LPS 0.5mg/kg，上述均用生理鹽水稀釋成0.5ml，其余兩組均給予等體積0.5ml生理鹽水。三組于第五天制作模型，Sham組僅游離不缺血，曠置30min，1h后處死動物取材。I/R組和LPS組缺血30min，再灌注時間分別為1、3、6、12小時。 HE染色顯微鏡下觀察各組標(biāo)本形態(tài)學(xué)改變，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及免疫印記跡法半定量測定胰腺組織的白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶-4(IRAK-4)m

3、RNA和蛋白表達(dá)水平，免疫組化法檢測NF-кB、ICAM-1表達(dá)。 結(jié)果 1．光鏡結(jié)果：Sham組僅有輕度水腫，病理學(xué)改變最輕；I/R組胰腺損傷病理改變較明顯：間質(zhì)水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤，有出血、壞死，甚至有大片狀壞死；LPS預(yù)處理組各時點(diǎn)病理改變均較同時點(diǎn)I/R組減輕，出血、壞死較少。 2．RT-PCR結(jié)果：I/R組和LPS組各時間點(diǎn)IRAK-4mRNA表達(dá)均高于Sham組(P<0.01)；I/R組IRAK-4

4、mRNA再灌注后6h表達(dá)最高(P<0.01)，隨后降低，而LPS組各時點(diǎn)IRAK-4mRNA表達(dá)水平無明顯改變，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，且LPS組各時間點(diǎn)的IRAK-4 mRNA的表達(dá)均明顯低于I/R組(P<0.01)。 3．Western Blot結(jié)果：I/R組和LPS組各時間點(diǎn)IRAK-4表達(dá)均明顯高于Sham組(P<0.01)：I/R組IRAK-4表達(dá)隨再灌注時間的延長逐漸增高，6h最高(P<0.01)，12h時

5、已明顯降低；LPS組各時點(diǎn)該蛋白的表達(dá)均低于同時點(diǎn)的I/R組，且隨再灌注時間的延長LPS組IRAK-4表達(dá)無明顯改變(P>005)。 4．免疫組化結(jié)果：I/R組和LPS組各時間點(diǎn)NF-кB和ICAM-1陽性表達(dá)率(灰度值)均高于Sham組(P<0.01)，兩組內(nèi)各指標(biāo)水平的變化(6h最高，隨后降低)均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；NF-кB和ICAM-1在LPS組各個時點(diǎn)中表達(dá)均明顯低于同時點(diǎn)I/R組(P<0.01)。