酮康唑?qū)W拉西坦在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)的影響.pdf

1、奧拉西坦（oxiracetam，ORC）是一種環(huán)γ-氨基丁酸類促智藥，作用谷氨酸鹽促代謝受體，防止谷氨酸所致的神經(jīng)毒性，可促進磷酰膽堿和磷酰乙醇合成，提高大腦對葡萄糖和氧的利用及三磷酸腺苷/二磷酸腺苷的比值，使大腦中核酸和蛋白質(zhì)的合成增加，研究顯示，奧拉西坦能夠很好的改善記憶和學(xué)習(xí)功能。
　　 奧拉西坦用于老年性癡呆、多梗死性癡呆及用于神經(jīng)癥、腦外傷、腦炎等引起的腦功能不全、記憶力障礙，為臨床廣泛應(yīng)用了的促智藥。奧拉西坦的藥理作

2、用和安全性已經(jīng)得到了確認，但其藥代動力學(xué)研究較少，尚未見奧拉西坦代謝機制及對肝藥酶的影響和藥物相互作用研究。
　　 酮康唑(Ketoconazole)是咪唑類抗真菌藥，為肝微粒體酶CYP3A4的抑制劑。本實驗以酮康唑作為肝微粒體酶CYP3A4的探針?biāo)幬?，探討酮康唑?qū)W拉西坦在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)的影響，從而確定奧拉西坦是否為肝微粒體酶奧酮康的底物，為奧拉西坦臨床合理應(yīng)用提供參考依據(jù)。
　　 目的:建立奧拉西坦在大鼠體內(nèi)血藥

3、濃度的HPLC測定方法，并對兩組分別給予奧拉西坦和酮康唑和奧拉西坦聯(lián)用的大鼠進行奧拉西坦血藥濃度的測定，考察兩藥合用后藥代動力學(xué)的特征，從而確定酮康唑?qū)W拉西坦在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)的影響。
　　 方法:
　　 1、給藥方法及血漿樣品采集:健康SD大鼠36只，隨機分為對照組（奧拉西坦組）和實驗組（酮康唑和奧拉西坦聯(lián)用），每組18只。對照組每天1次灌胃蒸餾水，實驗組每天1次灌胃酮康唑溶液，持續(xù)共5d后兩組大鼠一次性灌胃奧拉西

4、坦溶液，于給藥后不同時間眼內(nèi)眥取血，-40℃保存。
　　 2、血漿樣品處理:取冷凍血漿樣品室溫自然解凍，10000 r·min-1離心5 min，取上清液200μL于帶塞離心管中，加入內(nèi)標(biāo)溶液（濃度100μL·mL-1）20μL混勻，加乙腈300μL沉淀蛋白，渦旋振蕩1 min，10000 r·min-1離心5 min，取上清液400μL于離心管中，40℃水浴下氮氣流吹干，殘渣用100μL流動相復(fù)溶，進樣。
　　 3、色

5、譜條件:色譜柱:Diamonsil RP C18柱(4.6 mm×250 mm，5μm);流動相:乙腈-水(3.2∶96.8，V/V);流速:0.8 mL·min-1;檢測波長:210nm;柱溫:40℃;進樣量:20μL;內(nèi)標(biāo):阿昔洛韋。
　　 4、標(biāo)準(zhǔn)曲線:配制2，5，10，20，40，60，100μg·mL-1的奧拉西坦模擬血漿樣品，按血漿樣品處理方法處理后進樣。以奧拉西坦與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值(Y)對血漿藥物濃度(X)回歸標(biāo)準(zhǔn)

6、曲線方程。
　　 5、回收率:分別制備濃度為5，40，80μg·mL-1的奧拉西坦模擬血漿樣品各5份，按血漿樣品處理方法處理后進樣，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程可以計算出的測得的濃度和理論的濃度的比值，就可以得到方法回收率。
　　 6、精密度:制備濃度分別為5，40，80μg·mL-1的奧拉西坦的模擬血漿樣品各5份。然后于一日內(nèi)分別在0，1，2，3，4h處理并進行測定，計算得到日內(nèi)精密度;于0，1，2，3，4日處理測定，計算得到日間

7、精密度。
　　 7、穩(wěn)定性:對40μg·mL-1的奧拉西坦的模擬血漿樣品進行處理后，于0，1，2，3，4h分別測定，考察處理樣品的穩(wěn)定性;對40μg·mL-1的奧拉西坦的模擬血漿樣品或即刻進行處理測定或-40℃低溫并避光保存5天進行處理并測定，考察低溫保存的穩(wěn)定性;對40μg·mL-1的奧拉西坦的模擬血漿樣品即刻進行處理或反復(fù)凍融3次進行處理并測定，考察反復(fù)凍融穩(wěn)定性。
　　 8、藥代動力學(xué)分析:大鼠的血漿樣品按照血漿樣

8、品處理方法進行處理并且測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程來計算出血漿中藥物濃度，并用DAS2.1.1藥代動力學(xué)軟件來對大鼠的藥-時數(shù)據(jù)進行處理，計算出各藥代動力學(xué)參數(shù)，并且對兩組藥代動力學(xué)參數(shù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，考察其有無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、奧拉西坦的保留時間為3.7 min，阿昔洛韋的保留時間為7.4 min，血漿內(nèi)源性物質(zhì)不干擾奧拉西坦和阿昔洛韋的測定。
　　 2、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:Y=0.0217 X+0.1

9、058，相關(guān)系數(shù)r=0.9992，表明奧拉西坦的血漿藥物濃度在2～100μg·mL-1有良好的線性關(guān)系。
　　 3、回收率:提取低、中、高濃度的奧拉西坦的血漿樣品方法回收率依次為（102.3±8.51）％，（96.29±2.76）％和（98.14±1.62）％，RSD值依次為8.32％，2.87％和1.65％。
　　 4、精密度:結(jié)果表明，低、中、高三種不同濃度的血漿樣品的日內(nèi)精密度的RSD值依次為13.03％，2.87

10、％和1.65％;日間精密度的結(jié)果顯示，低、中、高三種不同濃度血漿樣品RSD值依次為12.60％，5.42％和3.72％。
　　 5、穩(wěn)定性:低溫保存5天與反復(fù)凍融3次后的血漿樣品的性質(zhì)穩(wěn)定，其RSD值依次為2.62％和1.03％;處理血漿的樣品放置4h后對測定結(jié)果不影響，其RSD值為1.09％。
　　 6、藥代動力學(xué)特征:對照組的大鼠和實驗組的大鼠按照設(shè)計的方案給藥后，計算出的藥代動力學(xué)參數(shù)如下:t1/2分別為（2.80

11、7±0.880）h和（3.231±1.020）h;Cmax分別為（52.80±16.94）mg·L-1和（47.33±8.317）mg·L-1; Tmax分別為（2.7±0.690）h和（2.4±0.480）h; AUC(0-12h)分別為（257.2±77.84） mg·h·L-1和（258.9±67.30） mg·h·L-1; AUC(0-∞)h分別為（280.8±91.95） mg·h·L-1和（289.2±78.27） mg·h

12、·L-1;CL/F分別為（0.791±0.2700） L·h·Kg-1和（0.473±0.210） L·h·Kg-1;V/F分別為(3.111±1.480) L·Kg-1和（3.338±1.050) L·Kg-1。
　　 結(jié)論:
　　 1、本實驗建立了HPLC測定奧拉西坦在大鼠血漿中濃度的方法，該方法能夠使內(nèi)標(biāo)和奧拉西坦分離良好，血漿中的內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾測定結(jié)果;血漿樣品低溫保存5天或者反復(fù)凍融3次性質(zhì)依然穩(wěn)定，處理血漿

13、樣品放置4h不干擾測定結(jié)果;該測定方法的特點準(zhǔn)確、簡單、重現(xiàn)性好，非常適用于測定大鼠血漿中的奧拉西坦的含量。
　　 2、大鼠在給予安慰劑或酮康唑達到穩(wěn)態(tài)后再給予奧拉西坦，兩組的藥代動力學(xué)參數(shù)除MRT0-12h差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)外，AUC0-12、AUC0-∞、Tmax、Cmax、t1/2、CL/F和V/F差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，因此，初步認為酮康唑?qū)W拉西坦在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)無顯著性影響，奧拉西坦不