銀杏營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)的分離鑒定及特性研究.pdf

1、本文以銀杏(Ginkgo biloba L.)不同生長時期韌皮部薄壁組織超微結(jié)構(gòu)的解剖學(xué)研究為突破口，應(yīng)用酶標(biāo)和膠體金免疫細(xì)胞定位技術(shù)，結(jié)合組織化學(xué)和生物化學(xué)分析，進(jìn)行了銀杏營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)的準(zhǔn)確定位；通過聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)(SDS-PAGE)進(jìn)行了銀杏營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)的組分分析、分離純化和糖蛋白質(zhì)特性研究，確定了銀杏營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)的主要組分；闡明了銀杏營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)季節(jié)性動態(tài)變化規(guī)律及與銀杏生長發(fā)育的相關(guān)性；揭示了銀杏營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)的

2、形成、積累、降解的基本規(guī)律。這對于提高銀杏氮素養(yǎng)分利用率，指導(dǎo)適時合理施肥以及今后采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育高氮素利用率的優(yōu)良品種等方面均具有重大理論價值和實(shí)踐意義。主要結(jié)論如下： 銀杏營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)在枝條和根系的韌皮薄壁細(xì)胞、韌皮射線細(xì)胞、木射線、次生韌皮部與初生木質(zhì)部之間的細(xì)胞中均有分布。但以韌皮薄壁細(xì)胞的液泡最為豐富。銀杏韌皮薄壁細(xì)胞內(nèi)的營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)合成，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膨大的槽庫、質(zhì)膜內(nèi)折或高爾基體小泡發(fā)育形成貯藏蛋白質(zhì)的液

3、泡。液泡蛋白質(zhì)主要以不定形塊狀、絮狀、顆粒狀和均一細(xì)沙狀等四種形式存在。 銀杏營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)主要存在于枝條的皮層和木質(zhì)部中；當(dāng)年生枝條含量高于二年生枝條，皮層的含量高于木質(zhì)部；銀杏營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)的動態(tài)變化分為積累和降解兩個階段，5月份隨著新梢伸長及新生葉片的形成，新梢開始積累營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)，在生長季節(jié)貯藏蛋白質(zhì)含量不斷增加，在12月份含量達(dá)到最高，在整個越冬期間一直保持高含量水平，直到翌年春季芽萌發(fā)時，貯藏蛋白質(zhì)迅速降解、轉(zhuǎn)移再

4、利用，滿足新梢生長發(fā)育的要求，到4月14日枝條中貯藏蛋白質(zhì)幾乎完全降解。 銀杏枝條貯藏蛋白質(zhì)組分可分為高分子量、中分子量和低分子量三類；同一分子量的營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)對應(yīng)不同的等電點(diǎn)，從蛋白質(zhì)的分子量和等電點(diǎn)兩方面確定以下成份為銀杏的營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)：(36.4，5.56)(36.3，4.57)(36.1，5.35)(36.4， 5.49)(36.2， 6.46)(36.2， 5.02)(36， 6.33)(36， 6.74)(36.

5、1， 4.62)(36.4，5.19)(36，6.2)(36，6.43)(32.3，5.15)(32.4，4.66)(32.1，6.6)(32.1，6.3)(32.2，4.74)(32，5.97)(32.1，6.45)(32，5.75)。銀杏營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)具有典型的糖蛋白特性。 運(yùn)用制備型SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離并制備了銀杏32kDa和36kDa兩種營養(yǎng)貯藏蛋白質(zhì)抗原，分別四次免疫新西蘭大白兔，采血提取抗血清后，雙向瓊脂免