重組病毒TMVSc1754在敏感性煙草上引發(fā)的過敏性反應(yīng)的研究.pdf

1、煙草花葉病毒(tobacco mosaic virus，TMV)是一種桿狀的正鏈RNA病毒。野生型TMV可以系統(tǒng)地感染敏感性煙草N.tabacum cv．Samsun nn并產(chǎn)生典型的花葉癥狀。但是，重組病毒TMVSc1754卻能在敏感性煙草上引發(fā)枯斑反應(yīng)。對(duì)多個(gè)過敏性反應(yīng)(Hypersensitive response，HR)標(biāo)志性基因進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在這個(gè)過程中它們的表達(dá)都不同程度上調(diào)。與此同時(shí)，多個(gè)精胺響應(yīng)性的基因也受誘導(dǎo)表達(dá)。并且

2、精胺合成途徑關(guān)鍵酶抑制劑MGBG可以大大遏制這個(gè)枯斑反應(yīng)。由此推測(cè)，TMVSc1754是經(jīng)由精胺信號(hào)通路在敏感性煙草上引發(fā)HR反應(yīng)的。 為了確定這個(gè)HR過程中的激發(fā)子，構(gòu)建了一系列的突變病毒。結(jié)果表明，煙草花葉病毒外殼蛋白(coat protein，CP)C末端的6個(gè)氨基酸缺失不會(huì)在敏感煙草上引發(fā)枯斑反應(yīng)，重組病毒RNA也不能直接引發(fā)HR反應(yīng)，只有病毒RNA編碼的重組CP蛋白才能引發(fā)這個(gè)HR反應(yīng)。 將Sc1754CP和增

3、強(qiáng)型綠色熒光蛋白(enhance green nuorescent protein，EGFP)融合，插入到真核表達(dá)載體pBI121中，通過基因槍轟擊的方法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞。細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Sc1754CP主要定位在細(xì)胞外周的細(xì)胞膜或細(xì)胞壁上。 利用原核表達(dá)技術(shù)，在大腸桿菌中大量表達(dá)了Sc1754CP等重組CP蛋白，并通過免疫家兔的方法制備了多克隆抗體。隨后經(jīng)過交叉吸附的方法，最終得到了特異性的抗Sc1754CP多克隆抗體和抗T