肝臟血流阻斷對藥物動力學(xué)影響的動物實驗研究.pdf

1、目的:
　　 通過比較5氟尿嘧啶和克林霉素磷酸酯在pringle組、半肝血流阻斷組以及肝下下腔靜脈聯(lián)合半肝血流阻斷組于對照組（無阻斷血流組）在家兔體內(nèi)藥物動力學(xué)行為的差異，研究肝血流阻斷對兩種藥物動力學(xué)的影響，從而為臨床手術(shù)中用藥劑量的調(diào)整做參考依據(jù)，以防術(shù)中發(fā)生藥物蓄積導(dǎo)致中毒。
　　 方法:
　　 動物實驗方法:健康成熟家兔80只隨機分為1組（注射5-氟尿嘧啶組）、2組（注射克林霉素磷酸酯組），雌雄不限，體重

2、1.5-2.5kg，然后再將兩組家兔隨機再分成ABCD四組分別為對照組不阻斷血流、pringle法、半肝阻斷法和肝下下腔靜脈聯(lián)合半肝血流阻斷的方法，A組不阻斷給藥后三組分別在阻斷后給藥，然后1組注射5-氟尿嘧啶，2組注射克林霉素磷酸酯。于給藥后5，10，15，20，25，30，min分別采頸靜脈血2ml，置于肝素管中，5℃冰箱保存，直至全部血漿樣品采集完成。
　　 檢測方法建立:色譜條件:第1組（注射5-氟尿嘧啶組）的色譜條件是

3、色譜柱為迪馬公司DiamonsilC18(250mmX4.6mm，5μm)，流動相:水-甲醇(93:7)，流速:1.0ml/min，柱溫:30℃，紫外檢測波長:254nm，進(jìn)樣量20μL;第2組（注射克林霉素磷酸酯組）的色譜條件:色譜柱為迪馬公司DiamonsilC18(250mmX4.6mm，5μm)，流動相:30mmol/l鹽酸三乙胺(pH=2.65)(:)乙腈(80(:)20V/V)，流速:1.0ml/min，柱溫:30℃，波長:

4、210nm，進(jìn)樣量20μL。標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:在空白血漿中分別加入標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，配制成濃度為100，50，25，10，5，1μg·ml-1的系列血漿標(biāo)準(zhǔn)液，按“樣品處理方法”內(nèi)標(biāo)、處理樣品、進(jìn)樣測量。通過N3000色譜工作站進(jìn)行圖譜采集、記錄峰面積和相關(guān)參數(shù)。以樣品的色譜吸收峰面積(As)與內(nèi)標(biāo)的色譜吸收峰面積(Ai)比值(As/Ai)對樣品濃度(C)作直線回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程和相關(guān)系數(shù)。樣品的處理:用精密移液器取

5、血漿200μL，加入100.0μg·mL-1的內(nèi)標(biāo)液50μL旋渦振蕩2min，加入和20％高氯酸50μL，旋渦振蕩1min，混勻，置入高速離心機離心20min(15000·r/min)，用移液器迅速轉(zhuǎn)收取上清液，轉(zhuǎn)移到2ml錐形離心管內(nèi)，待測。
　　 結(jié)果:
　　 本實驗研究了5氟尿嘧啶和克林霉素磷酸酯在模擬A（不阻斷血流）、B（肝下下腔靜脈聯(lián)合半肝血流阻斷）、C（半肝血流阻斷）、D(pringle)這四種方法在家兔體內(nèi)

6、的藥物動力學(xué)，采用3p97藥物動力學(xué)軟件處理，房室模型分析表明:分別給A、B、C、D四組靜脈注射2ml/kg5氟尿嘧啶和5ml/kg克林霉素磷酸酯后，其最佳藥動學(xué)模型上均不存在差異，在家兔體內(nèi)的藥物動力學(xué)過程均符合一級吸收二室開放模型。A、B、C、D四組注射5氟尿嘧啶的主要藥動學(xué)參數(shù)如下:t1/2α（分布相半衰期）分別為3.15±0.31 min、5.15±0.29min、6.04±0.37min、10.53±0.26min。Cmax（

7、血藥峰濃度）分別為:54.99±0.41mg/L、56.48±0.28mg/L、57.34±0.43mg/L、59.29±0.33mg/L。表觀分布容積Vd分別2.46±0.31L/kg、1.81±0.41L/kg、1.49±0.29L/kg、0.61±0.52L/kg。清除率CL值為0.018±0.007L/min、0.017±0.005L/min/、0.016±0.007L/min、0.010±0.004L/min/kg;A、B、C

8、、D四組注射克林霉素的主要藥動學(xué)參數(shù)如下:t1/2α（分布相半衰期）分別為18.33±0.46min、23.80±0.33min、25.97±0.47min、44.51±0.23min。Cmax(血藥峰濃度)分別為:847.91±0.45mg/L、871.32±0.55mg/L、885.61±0.73mg/L，898.35±0.64mg/L。表觀分布容積Vd分別0.747±0.018L/kg、0.729±0.017L/kg、0.721±

9、0.045L/kg、0.701±0.055L/kg。清除率CL值為0.739±0.137L/min、0.028±0.08L/min、0.019±0.089L/min、0.012±0.164L/min;
　　 5-氟尿嘧啶標(biāo)準(zhǔn)樣和克林霉素磷酸酯進(jìn)樣測得結(jié)果都有很好的峰形，5-氟尿嘧啶的保留時間為(7.20±0.25)min，內(nèi)標(biāo)物保留時間為(15.52±0.50)min;克林霉素磷酸酯的保留時間為(14.82±0.25)min，內(nèi)

10、標(biāo)物保留時間為(4.52±0.50)min;
　　 樣品的色譜吸收峰面積(AS)與內(nèi)標(biāo)的色譜吸收峰面積(Ai)的比值(As/Ai)對樣品濃度(C)作直線回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程和相關(guān)系Y=76.8386894806X-0.3980725458(As/Ai)，(r=0.9997383631，n=6)，結(jié)果表明血漿濃度在1-100μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。在本實驗條件測得5-氟尿嘧啶定量下限為0.5μg·

11、mL-1;2組標(biāo)準(zhǔn)曲線方程建立方法同上，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程和相關(guān)系Y=0.2483263225+64.3356372721X(As/Ai)，(r=0.9984335256，n=6)，結(jié)果表明血漿濃度在1-100μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。在本實驗條件測得5-氟尿嘧啶定量下限為0.625μg·mL-1。
　　 血漿樣品相對回收率:測得第1組血漿中5-氟尿嘧啶濃度的平均回收率為109％，其RSD均小于10％

12、。測得第2組血漿中克林霉素磷酸酯濃度的平均回收率為98.9％，其RSD均小于5％。
　　 結(jié)論:
　　 試驗結(jié)果表明，四組在靜脈注射5氟尿嘧啶和克林霉素磷酸酯后，最佳藥動學(xué)模型上均不存在差異，但其主要藥動學(xué)參數(shù)上存在較大的差異。參考兩種藥物在A、B、C、D四組的藥物動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行總結(jié):t1/2α參數(shù)值從短到長依次為:不阻斷血流組——肝下下腔靜脈聯(lián)合半肝血流阻斷組——半肝血流阻斷組——pringle組，其半衰期越短說明其藥

13、物發(fā)揮作用越快，代謝也越快。在同等劑量給藥后，四者的Cmax也存在較大差異(P＜0.01)，四組的Cmax參數(shù)值從高到低依次為:pringle組——半肝血流阻斷組——肝下下腔靜脈聯(lián)合半肝血流阻斷組——不阻斷血流組，Cmax參數(shù)值越低就表明其藥物吸收的速度越快。四組的Vd參數(shù)值從大到小依次為:不阻斷血流組——肝下下腔靜脈聯(lián)合半肝血流阻斷組——半肝血流阻斷組——pringle組，Vd參數(shù)值越大就表明藥物在家兔體內(nèi)組織穿透性強，分布廣泛。四組

14、CL也存在一定差異，CL參數(shù)值從高到低排序依次為:不阻斷血流組——肝下下腔靜脈聯(lián)合半肝血流阻斷組——半肝血流阻斷組——pringle組，CL越高，表現(xiàn)為體內(nèi)藥物清除越快，其血藥濃度維持時間越短，代謝速率也就越快。對注射5氟尿嘧啶和克林霉素磷酸酯的四條藥時曲線圖進(jìn)行分析之后，對比得出藥物在家兔體內(nèi)的代謝從快到慢排序依次為:不阻斷血流組——肝下下腔靜脈聯(lián)合半肝血流阻斷組——半肝血流阻斷組——pringle組。此結(jié)果提示在臨床上給不同血流阻斷