他莫昔芬處理子宮內(nèi)膜癌細胞后ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53變化的研究.pdf

1、目的:子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展與很多因素有關(guān)，如長期雌激素刺激同時無孕激素拮抗等機制。同時，他莫昔芬(tamoxifen TAM)作用后，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率明顯升高。但是，目前對于TAM引起子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機制仍不清楚。關(guān)于染色體重組復(fù)合物的研究日益增多，具有抑制DNA合成的作用，故其突變低表達能夠促進細胞無限分裂，進而發(fā)展成癌。ARID1A(AT-richinteracting domain c

2、ontaining protein，又稱腦蛋白120、SMARCF1、p270等）是染色質(zhì)重組復(fù)合物之一，同時作為抑癌基因，在多種腫瘤組織中存在突變。目前對于ARID1A的結(jié)構(gòu)研究較多，對其在子宮內(nèi)膜癌中的表達及生物學功能的研究較少。本研究通過檢測ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53在子宮內(nèi)膜癌細胞(高分化Ishikawa、中分化HEC-1A及低分化KLE)中的基因和蛋白的表達水平，并進一步分析TAM及雌激素(estrogen E

3、2)處理后子宮內(nèi)膜癌細胞中ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53基因和蛋白的表達水平變化，探討ARID1A在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中的可能作用機制。
　　方法:
　　1應(yīng)用實時定量qRT-PCR法檢測正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜癌細胞株（Ishikawa、HEC-1A、KLE）中ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53 mRNA的表達水平。
　　2應(yīng)用實時定量qRT-PCR法檢測TAM及E2依據(jù)不同濃度及不同時間處

4、理細胞后ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53 mRNA的表達水平。
　　3應(yīng)用Western-blot法檢測正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜癌細胞株（Ishikawa、HEC-1A、KLE）中BAF250a、ERα、ERβ、PR、P53蛋白的表達水平。
　　4應(yīng)用Western-blot法檢測TAM及E2依據(jù)不同濃度及不同時間處理細胞后BAF250a、ERα、ERβ、PR、P53蛋白的表達水平。
　　5應(yīng)用流式細胞學測

5、定TAM及E2依據(jù)不同濃度及不同時間處理細胞后細胞周期變化情況。
　　結(jié)果:
　　1 ARID1A、ERα、ERβ mRNA及蛋白在三種子宮內(nèi)膜癌細胞中的表達均顯著低于其在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達，經(jīng)過TAM或E2處理后，ARID1A、ERα、ERβ mRNA及蛋白表達量隨著藥物濃度的增加而降低，隨著藥物處理時間的延長而降低(P＜0.05)，而PR、P53 mRNA及蛋白在三種子宮內(nèi)膜癌細胞中的表達低于其在正常子宮內(nèi)膜組織中

6、的表達，經(jīng)過TAM或E2處理后，PR、P53 mRNA及蛋白表達量隨著藥物濃度的增加而增加，隨著藥物處理時間的延長而增加，但均低于其在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達（P＜0.05），呈時間-劑量依賴性。
　　2經(jīng)過不同濃度TAM或E2在不同時間處理三種子宮內(nèi)膜癌細胞(Ishikawa、HEC-1A、KLE)后，三種細胞均表現(xiàn)為G0/G1期縮短，S期延長，且隨著藥物濃度的增高及處理時間的延長，G0/G1期逐漸縮短，S期逐漸延長（P＜0.0

7、5）。
　　結(jié)論:
　　1 TAM或E2處理子宮內(nèi)膜癌細胞后ARID1A、ERα、ERβmRNA及蛋白的表達明顯低于其在未經(jīng)藥物處理子宮內(nèi)膜癌中的表達，而PR、P53 mRNA及蛋白的表達明顯高于其在未經(jīng)藥物處理子宮內(nèi)膜癌中的表達。
　　2 TAM與E2可能通過下調(diào)ARID1A的表達而引起子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，而且ARID1A的下調(diào)可能與ER、P53存在一定相互作用關(guān)系。
　　3經(jīng)TAM與E2處理后子宮內(nèi)膜癌細胞的細