IFIT2在賁門腺癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、背景:賁門腺癌作為消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。由于賁門腺癌臨床上缺乏有效的早期診斷指標(biāo)，造成賁門腺癌患者大多數(shù)在就診時，腫瘤已發(fā)生轉(zhuǎn)移，臨床預(yù)后差。因此，深入研究賁門腺癌發(fā)生、發(fā)展中基因表達(dá)情況，對賁門腺癌的早期診斷、治療及預(yù)后有重要的意義。干擾素誘導(dǎo)基因2(IFN-induced protein withtetratricopeptide repeats2，IFIT2)作為IFIT家族的成員之一，具備了抵御病毒感染、免

2、疫調(diào)節(jié)、抵御細(xì)胞轉(zhuǎn)移和促細(xì)胞凋亡等生物學(xué)特性。相比IFIT2在抗病毒方面作用研究，該基因在抗腫瘤方面，報道較少，特別是在賁門腺癌未見報道。本研究旨在檢測IFIT2在賁門腺癌的表達(dá)情況及臨床意義。
　　目的:通過三種實(shí)驗(yàn)方法檢測IFIT2在賁門腺癌及癌旁組織中的表達(dá)情況，以了解IFIT2在賁門腺癌發(fā)生、發(fā)展及診療中的作用。探討可否將IFIT2作為監(jiān)測賁門腺癌早期診斷、靶向治療及判斷預(yù)后的重要指標(biāo)之一。
　　方法:采用隨機(jī)抽樣的

3、方法，選取2012.02至2013.10間在河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院接受賁門癌根治術(shù)的賁門癌患者手術(shù)標(biāo)本60對（包括癌和癌旁組織），其中，男31例，女29例。通過免疫組織化學(xué)及Western blotting方法分別從定性及定量兩方面檢測IFIT2在賁門腺癌及癌旁組織中的表達(dá)差異，運(yùn)用實(shí)時熒光定量RT-PCR技術(shù)從mRNA層面來檢測IFIT2在賁門腺癌及癌旁組織中的表達(dá)差異。應(yīng)用SPASS17.0統(tǒng)計軟件，分析IFIT2在癌與癌旁表達(dá)差

4、異，進(jìn)一步分析與賁門腺癌患者性別、臨床病理分化程度、臨床分期的關(guān)系。
　　結(jié)果:1.免疫組織化學(xué)的方法:顯示IFIT2在60例賁門腺癌的表達(dá)陽性率為25％(15/60)，在癌旁表達(dá)陽性率為70％(42/60)。IFIT2基因在癌組織和癌旁組織中的表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.001）;IFIT2陽性表達(dá)與腫瘤分化程度具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（x2，P=0.015）。IFIT2基因在癌組織中的表達(dá)及癌旁組織中的表達(dá)與患者性別無統(tǒng)計學(xué)意義（x

5、2，P=0.881，P=0.338），亦患者臨床分期(TNM)均無統(tǒng)計學(xué)意義(x2，P=0.563，P=0.884)。
　　2.Western-blotting方法驗(yàn)證:我們在所收集的60對標(biāo)本中，隨機(jī)選取8對標(biāo)本，利用Western-blotting方法驗(yàn)證IFIT2基因在癌組織和癌旁組織中的差異表達(dá)情況。Western-blotting結(jié)果先由凝膠成像系統(tǒng)（721BRO05922型，美國BIO-RAD公司）掃描，凝膠成像系統(tǒng)顯

6、示IFIT2蛋白大小約為60KDa，以蛋白大小為48 KDa的tublin作為內(nèi)參，再由凝膠圖像image軟件分析測得癌和癌旁表達(dá)條帶的灰度值，結(jié)果經(jīng)Wilcoxon符號秩和檢驗(yàn)，提示IFIT2基因在癌組織和癌旁組織中的差異表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=2.474，P=0.018)。
　　3.實(shí)時熒光定量RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證:對所收集的60對標(biāo)本中，隨機(jī)選取30對標(biāo)本，通過primer5軟件設(shè)計引物，應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR儀對IFIT2基

7、因在30對賁門腺癌腫瘤組織和癌旁正常組織中的差異表達(dá)情況的進(jìn)行了擴(kuò)增、分析、驗(yàn)證，得出IFIT2基因在賁門腺癌和癌旁組織中經(jīng)PCR檢測的Ct值，以GAPDH為內(nèi)參，根據(jù)定量PCR結(jié)果的計算公式[1]計算賁門腺癌腫瘤組織和癌旁正常組織中DNA的相對表達(dá)量2-△Ct，并且△Ct=（CtIFIT2—CtGAPDH）。經(jīng)t檢驗(yàn)，IFIT2基因在癌組織和癌旁組織中的差異表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.954，P＜0.001)。
　　結(jié)論:1.IF