POLD3在胃腺癌中的表達及臨床意義分析.pdf

1、目的：胃腺癌（gastric adenocarcinoma，GAC）屬于消化道惡性上皮性腫瘤，目前發(fā)病率仍高居我國男性惡性腫瘤第二位，死亡率為男性惡性腫瘤患者的前三位。DNA聚合酶δ（DNA polymerase delta，POLD）是真核細胞DNA聚合酶B族中的一員，廣泛參與生物體內DNA的復制及損傷修復過程，其第三亞基（DNA polymerase delta3，POLD3）作為POLD的輔助亞基，在POLD參與的各項生命活動中均

2、處于核心地位。目前在對POLD3與癌癥的關系研究中，能夠明確的是POLD3的突變體增加結直腸癌的發(fā)病風險、卵巢癌預后不良患者中POLD3的表達下調，但其與胃癌的關系暫未見報道。本課題通過免疫組織化學（immunohistochemistry，IHC）、蛋白印跡（western blotting，WB）、實時定量多聚酶鏈反應（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-q PCR

3、）、體外細胞學等技術檢測GAC組織與胃腺癌細胞系中POLD3的表達水平，分析了POLD3表達對GAC增殖、分化及預后等影響。
　　方法：⑴收集2005年1月至2008年12月期間在右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院住院的經(jīng)病理確診的、接受了根治性手術切除的GAC臨床I-II期病例；收集所有研究對象的手術切除石蠟標本和適量新鮮組織用于POLD3表達分析；同時，收集所有研究對象的相關臨床病理資料及生存隨訪資料，隨訪截止日期至2014年12月。⑵使

4、用IHC檢測POLD3蛋白在GAC腫瘤組織及腫瘤旁組織的表達情況，通過t檢驗分析POLD3在腫瘤組織與腫瘤旁組織間的表達差異；使用卡方檢驗、非條件Logistic回歸方法分析腫瘤組織中POLD3表達與GAC臨床病理特征的關系；通過Kaplan-Meier法繪制生存曲線并計算中位生存期（Median survival time，MST），通過多因素風險比例回歸模型計算POLD3對GAC總體死亡風險值。⑶使用RT-q PCR技術檢測POLD

5、3 mRNA在10例腫瘤組織與腫瘤旁組織的表達情況，通過t檢驗比較分析POLD3 mRNA在腫瘤組織與腫瘤旁組織間的表達差異。⑷常規(guī)培養(yǎng)2株人胃腺癌細胞系及1株人非腫瘤胃黏膜上皮細胞株，通過WB和RT-q PCR分別檢測各培養(yǎng)細胞系中POLD3蛋白和mRNA的表達水平。⑸通過分子克隆技術檢測分析體外過表達POLD3對GAC細胞增殖的影響。
　　結果：①當前研究共收集到符合要求的TNM分期為I-II期的GAC患者共82例，男性和女性

6、分別為58例（70.7％）和24例（29.3%），平均年齡53.17?11.19歲，其中早期胃癌4例（4.9%），進展期胃癌78例（95.1%），高分化者或中分化者占65.9%（54/82）、低或未分化者占34.1（28/82）。②與腫瘤旁組織相比，POLD3蛋白在GAC腫瘤組織中表達水平減少（P=4.26?10-14）；體外細胞學實驗有相似發(fā)現(xiàn)。③與腫瘤旁組織相比，POLD3 mRNA在GAC腫瘤組織中表達水平減少（P=8.00?10

7、-6）；體外細胞學實驗有相似發(fā)現(xiàn)（P=7.20?10-5）。④與低POLD3表達者相比，高POLD3表達者其腫瘤組織分化程度更高，對應貢獻值為5.00(1.35?-18.48)，P值為0.016；體外細胞學實驗有相似發(fā)現(xiàn)。⑤POLD3表達影響胃腺癌腫瘤大小，腫瘤直徑較大者，腫瘤組織中POLD3蛋白表達水平較低，Logistic回歸分析表明高POLD3表達者，抑制腫瘤生長的貢獻值為5.78（1.55-21.51），對應P值為0.009。⑥

8、POLD3表達影響體外培養(yǎng)胃腺癌細胞增殖，與空載或空白對照相比，低POLD3表達的MKN-45細胞株在接受了POLD3過表達載體后，其生長速度明顯受到抑制（P<0.05）。⑦POLD3表達水平影響胃腺癌患者的預后：高和低表達對應中位總體生存期分別為34和16個月（P<0.01），低POLD3表達者其總體死亡風險為高表達者2.43倍（可信區(qū)間為1.25-4.71）。
　　結論：POLD3在GAC腫瘤中表達下調，這種下調與腫瘤分化、增