鵝卵泡差異顯示表達(dá)序列標(biāo)簽（ESTs）的篩選及分析.pdf

1、本研究以產(chǎn)蛋期揚(yáng)州鵝為研究材料，采Oligo(dT<,10>)M(A/G/C)為錨定引物與23個(gè)隨機(jī)引物之間共69個(gè)組合的RT-PCR反應(yīng)對(duì)成熟卵泡總RNA進(jìn)行DDRT-PCR分析，并利用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)合銀染技術(shù)分離DDRT-PCR產(chǎn)物，共獲得差異條帶18條。經(jīng)過(guò)PCR再擴(kuò)增、電泳檢測(cè)和純化，共得到差異顯示的cDNA片段10條。經(jīng)二次PCR與第一次PCR結(jié)果比較，再經(jīng)Dot-blot驗(yàn)證后得到7條差異表達(dá)cDNA片段，委托上

2、海杰瑞生物工程有限公司克隆測(cè)序，獲得5個(gè)表達(dá)序列標(biāo)簽，且經(jīng)1.5％瓊脂糖電泳檢測(cè)顯示這些條帶比非差異顯示條帶弱，推測(cè)差異表達(dá)的基因表達(dá)豐度低。 五個(gè)差異顯示ESTs去除載體序列后用Blast檢索發(fā)現(xiàn)：在這5條差異表達(dá)片段中，EST YZGF01與人甲硫氨酸腺苷基轉(zhuǎn)移酶Ⅱ(MATⅡ)同源，同源性為95％，EST YZGF02與雞mKIAA0840 protein基因同源，同源性為94％。其余EST_YZGF03、EST_YZGF0