初生烏骨雞肝臟差異顯示ESTs的篩選及分析.pdf

1、本試驗(yàn)分別以1日齡絲羽烏骨雞(SK)、常羽烏骨雞(NP)、蘇禽蛋雞(SQ)、愛拔益加肉雞(AA)肝臟為研究材料，期望在排除飼養(yǎng)條件等環(huán)境因素對(duì)基因表達(dá)的影響下，比較初生蛋雞、肉雞和烏骨雞基因表達(dá)上的差異?！　〔捎?6堿基的三個(gè)錨定引物與24個(gè)隨機(jī)引物之間共72個(gè)組合的逆轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)對(duì)1日齡絲羽烏骨雞、常羽烏骨雞、蘇禽96型蛋雞、AA肉雞肝臟總RNA進(jìn)行DDRT-PCR分析，并利用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)合銀染技術(shù)分離DDRT-PC

2、R產(chǎn)物，共獲得四個(gè)品種間差異條帶251條。經(jīng)過PCR再擴(kuò)增、電泳檢測(cè)和純化，共得到差異顯示的cDNA片段220條(重?cái)U(kuò)增率為87.6％)。經(jīng)SSCP檢測(cè)獲得198個(gè)重?cái)U(kuò)增產(chǎn)物表現(xiàn)為單一cDNA的帶型，單一條帶率為90％。經(jīng)過基因芯片雜交掃描，比較綜合掃描數(shù)據(jù)獲得8個(gè)真實(shí)的差異表達(dá)cDNA片段，委托上海生物工程公司克隆測(cè)序，獲得4個(gè)ESTs序列。4個(gè)差異顯示ESTs較短，且經(jīng)1％瓊脂糖電泳檢測(cè)顯示這些條帶比非差異顯示條帶弱，推測(cè)差異表達(dá)的

3、基因表達(dá)豐度低?！　∷膫€(gè)差異顯示ESTs去除質(zhì)粒污染序列后向Genbank提交，獲得登陸號(hào)DQ003271-DQ003274。經(jīng)與雞基因組比對(duì)，分別進(jìn)行了定位。具體定位是DQ003271：5號(hào)染色體；DQ003272：3號(hào)染色體；DQ003273：線粒體；DQ003274：19號(hào)染色體。其中DQ003271為家雞新的EST，推測(cè)其功能與包含卷曲螺旋結(jié)構(gòu)的蛋白的表達(dá)有關(guān)。其余3個(gè)為家雞已知表達(dá)序列標(biāo)簽，其中DQ003272在機(jī)體免疫功能