H-,2-S-CSE系統(tǒng)在肺缺血-再灌注損傷中作用.pdf

1、目的：探討胱硫醚-γ-裂解酶（cystanthionine-γ-splitting enzyme，CSE）與硫化氫（Hydrogen sulfid，H2S）系統(tǒng)在肺缺血一再灌注損傷中的作用。 方法：健康SD大鼠隨機分成4組，假手術對照組（sham組），肺缺血一再灌注組（LIR組），肺缺血一再灌注+硫氫化鈉組（LIR+NaHS組），肺缺血一再灌注十炔丙基甘氨酸組（LIR+PPG組），每組10只。麻醉后左側(cè)開胸，游離肺門，穿過阻斷帶

2、，復制在體原位單肺缺血-再灌注模型。sham組左肺門過阻斷帶后不阻斷肺門；LIR組左肺門過阻斷帶后阻斷左肺門缺血30min，松開阻斷帶再灌注120min； LIR+NaHS組手術前5天每天腹腔注射NaHS（28μmol/kg，溶于0.5mL生理鹽水）；手術前15min再次注射；其余同LIR組。LIR+PPG組手術前5天每天腹腔注射PPG（30mg/kg，溶于0.5 mL生理鹽水）；手術前15min再次注射；其余同LIR組。各組實驗結(jié)束后

3、抽血檢測H2S濃度，丙二醛（MDA）含量，髓過氧化物酶（MPO），超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮合酶（NOS）活力和一氧化氮（NO）含量；同時取肺組織測肺系數(shù)，檢測組織H2S含量及CSE酶活力；RT-PCR法檢測肺組織CSEmRNA的表達；光鏡觀察肺組織形態(tài)學改變及計數(shù)肺泡損傷數(shù)；應用免疫組化觀察肺組織bcl-2，bax蛋白的表達強度；TUNEL檢測肺組織細胞凋亡；電鏡觀察細胞超微結(jié)構的改變。 結(jié)果： 1.LIR組大

4、鼠血漿和肺組織H2S含量均低于Sham組（P<0.01）；LIR+NaHS組顯著高于LIR組（P<0.01）；LIR+PPG組顯著低于LIR組（P<0.05）。LIR+NaHS組顯著高于LIR+PPG組（P<0.01）。 2.各組大鼠肺組織CSE活性的變化同血漿、肺組織H2S含量的變化相似。在LIR組低于Sham組（P<0.01）；LIR+NaHS組顯著高于LIR組（P<0.01）；LIR+PPG組顯著低于LIR組（P<0.05

5、）。LIR+NaHS組顯著高于LIR+PPG組（P<0.01）。 3.大鼠肺組織CSEmRNA的表達LIR組低于Sham組（P<0.01）；LIR+NaHS組高于LIR組（P<0.01）；LIR+PPG組低于LIR組（P<0.05）。 4.與Sham組比較，LIR組血漿MDA含量和MPO活性顯著增高（P<0.01），血漿SOD活性顯著降低（P<0.01）；與LIR組比較，LIR+NaHS組MDA含量和MPO活力顯著降低，

6、SOD活性升高（P<0.01）；而LIR+PPG組MDA含量和MPO活力又顯著增高，SOD活性顯著降低（P<0.05）。 5.與Sham組比較，LIR組血漿iNOS活性降低（P<0.05），NO含量降低（P<0.01）；與LIR組比較，LIR+NaHS組iNOS活力升高（P<0.05），NO含量升高（P<0.01）；而LIR+PPG組iNOS，NO均顯著降低（P<0.01） 6.bcl-2、bax蛋白表達的免疫組化染色，

7、LIR組較Sham組明顯增強，其吸光度值比較有顯著差異（均P<0.01），同時bcl-2/bax的比值降低（均P<0.01）。與LIR組比較，LIR+NaHS組bcl-2蛋白表達增強，吸光度值增高，bax表達減弱，吸光度值降低，bcl-2/bax的比值增高（P<0.05）：而LIR+PPG組bcl-2表達減弱，吸光度值降低，bax表達增強，吸光度值增高，bcl-2/bax的比值降低（P<0.05或P<0.01）。 7.肺組織原位

8、細胞凋亡檢測示LIR組凋亡指數(shù)顯著高于Sham組（P<0.01）；LIR+NaHS組顯著低于LIR組（P<0.01）；LIR+PPG組高于LIR組（P<0.05）。 8.肺系數(shù)與肺泡損傷數(shù)。LIR組和LIR+PPG組均比Sham組為高，LIR+PPG更加明顯；LIR+NaHS組顯著低于LIR及LIR+PPG組。 9.光鏡觀察：Sham組肺間質(zhì)及肺泡結(jié)構保持完整，無明顯受損，未見明顯炎性細胞；LIR組肺間質(zhì)增寬水腫，炎癥細

9、胞浸潤，肺泡內(nèi)可見較多紅細胞滲出，損傷明顯；LIR+NaHS組肺間質(zhì)水腫程度減輕，炎癥細胞浸潤減少，肺泡內(nèi)紅細胞滲出減少，肺泡較完整；LIR+PPG組肺不張伴肺氣腫，肺間質(zhì)水腫明顯，炎癥細胞大量浸潤，肺泡內(nèi)可見較多紅細胞滲出，損傷基本與LIR組相似，部分比LIR組嚴重。 10.電鏡觀察：Sham組Ⅱ型肺泡上皮細胞（ATⅡ細胞）超微結(jié)構基本正常；LIR組肺內(nèi)毛細血管內(nèi)皮細胞腫脹，ATⅡ細胞表面微絨毛減少，線粒體腫脹，板層小體稀少，

10、出現(xiàn)較多空泡。肺泡隔水腫，肺泡隔及毛細血管內(nèi)炎癥細胞附壁，以中性粒細胞為主；LIR+NaHS組毛細血管和肺泡結(jié)構有所改善，毛細血管內(nèi)炎癥細胞減少，ATⅡ細胞表面微絨毛及板層小體增多。肺泡隔輕度水腫；LIR+PPG組ATⅡ細胞表面平坦，微絨毛極少，板層小體稀少并逸出胞質(zhì)中，伴有空泡。肺泡隔水腫，炎性細胞聚集。 結(jié)論： 1.H2S/CSE體系功能下調(diào)參與肺缺血-再灌注損傷的發(fā)生發(fā)展。 2.預先給予一定量的外源性NaH