COX-2參與燒傷誘導(dǎo)脂肪分解代謝的作用機制研究.pdf

1、目的:通過觀察大鼠燒傷血清對3T3-L1前脂肪細胞增殖活性和成脂分化能力的影響,探索燒傷血清參與脂肪分解代謝的分子機制。研究燒傷對 BALB/c小鼠棕色脂肪組織(brown adipose tissue, BAT)的影響。研究塞來昔布對燒傷 BALB/c小鼠脂肪分解代謝的影響并探討其可能機制。
　　方法第一部分:選擇成年雄性 SD大鼠48只,隨機分為假傷組及燒傷1d、4d、7d、14d、21d組,每組8只。各燒傷組大鼠制備背部30

2、％TBSAⅢ度燙傷模型,分別于對應(yīng)時間點收集血清;假傷組只進行假傷處理,取血清作為對照。采用各組血清培養(yǎng)3T3-Ll前脂肪細胞,MTT法檢測細胞增殖活性,選擇細胞增殖最低組燒傷血清作為后續(xù)刺激血清。取3T3-Ll前脂肪細胞分別培養(yǎng)并分為假傷血清組、燒傷血清組、假傷血清成脂誘導(dǎo)組、燒傷血清成脂誘導(dǎo)組。倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,誘導(dǎo)培養(yǎng)7 d后進行油紅O染色,進行脂肪細胞計數(shù)并測量吸光度(A)值,實時定量PCR以及Western blo

3、t檢測過氧化物酶增殖體激動劑受體(preoxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)和脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase, LPL)基因及蛋白表達。
　　方法第二部分:選擇BALB/c雄性小鼠40只,隨機分為對照組及燒傷組,每組20只。燒傷組采用BALB/c小鼠背部30%TBSAⅢ度燙傷模型,觀察兩組間小鼠體重、體溫、體脂百分比、白色脂肪組織(white adipos

4、e tissue, WAT)和棕色脂肪組織(brown adipose tissue, BAT)重量、形態(tài)學(xué)變化,以及解偶聯(lián)蛋白-1(uncoupled protein-1, UCP-1)表達水平的變化。
　　方法第三部分:選擇BALB/c雄性小鼠100只,隨機分為對照組、塞來昔布組、燒傷組及燒傷塞來昔布治療組,每組25只。采用BALB/c小鼠背部30%TBSAⅢ度燙傷模型,觀察研究各組間小鼠體重、體溫、體內(nèi)水含量、體內(nèi)脂肪含量、

5、體內(nèi)肌肉含量、體脂百分比、EE、RER、VO2、VCO2、白色脂肪組織(white adipose tissue, WAT)和棕色脂肪組織(brown adipose tissue, BAT)重量、形態(tài)學(xué)變化,解偶聯(lián)蛋白-1(UCP-1)以及環(huán)氧酶-2(COX-2)基因及蛋白表達水平的變化。
　　結(jié)果第一部分:SD大鼠血清培養(yǎng)3T3-Ll前脂肪細胞研究中,MTT法檢測細胞增殖活性,與其余各組比較,燒傷4、7d組細胞增殖能力顯著降低

6、,其中7d組細胞增殖活性最低,取燒傷7d大鼠血清作為后續(xù)刺激血清。倒置相差顯微鏡下觀察3T3-Ll細胞形態(tài),假傷血清對照組、燒傷血清對照組對比無明顯變化;3T3-Ll前脂肪細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)后假傷血清成脂誘導(dǎo)組、燒傷血清成脂誘導(dǎo)組3T3-Ll前脂肪細胞呈脂肪細胞樣變。其中假傷血清成脂誘導(dǎo)組成脂肪細胞量最多。油紅 O染色示,假傷血清成脂誘導(dǎo)組3T3-Ll前脂肪細胞染色呈陽性,燒傷血清成脂誘導(dǎo)組細胞為弱陽性,其余均為陰性;油紅O染色后的脂肪細胞計

7、數(shù)和油紅O染色定量比較,假傷血清組與燒傷血清組比較(P<0.05)有顯著差異,假傷血清成脂誘導(dǎo)組與燒傷血清成脂誘導(dǎo)組比較(P<0.05)有顯著差異。實時定量PCR及Western blot檢測示,燒傷血清組PPARγ基因表達量較假傷血清組明顯下降(P<0.05),但LPL基因表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);PPARγ、LPL蛋白表達量假傷血清組和燒傷血清組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。燒傷血清導(dǎo)組誘導(dǎo)組PPARγ、LP

8、L基因及蛋白表達量較假傷血清成脂誘導(dǎo)組均顯著下降(P<0.05)。
　　結(jié)果第二部分:燒傷可引起B(yǎng)ALB/c小鼠棕色脂肪、白色脂肪形態(tài)學(xué)顯著變化。燒傷組小鼠的體重、WAT重量、白色脂肪體脂百分比均顯著低于對照組(P<0.05),燒傷組小鼠體溫、BAT重量、棕色脂肪體脂百分比及 UCP-1蛋白表達量顯著高于對照組(P<0.05)。
　　結(jié)果第三部分:燒傷組BALB/c小鼠體重、體內(nèi)水分、脂肪、肌肉含量、WAT重量、白色脂肪體脂