骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠離體肝切除自體肝移植中肝功能保護作用的觀察及機制初步研究.pdf

1、研究背景: 離體肝切除自體肝移植術(shù)是基于肝移植技術(shù)治療肝臟特殊部位腫瘤的一種手術(shù)方式，因手術(shù)難度大，全球至今開展不多，更無相關(guān)基礎(chǔ)研究。西南醫(yī)院肝膽外科開展該類手術(shù)多年，手術(shù)例數(shù)已累計38例，其與肝移植術(shù)最大不同之處是在有肝硬化為基礎(chǔ)病變下進行超長時間、難度大、復(fù)雜手術(shù)。故術(shù)后如何減少肝功能不全成為首先關(guān)注的問題。研究已證實，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)能改善肝硬化患者肝功，其在改善離體肝切除自體肝移植術(shù)后肝功能有較好的前景。

2、　　 研究目的及理論意義: 創(chuàng)建了離體肝切除自體肝移植手術(shù)動物模型，為相關(guān)基礎(chǔ)研究提供平臺。通過模型大鼠經(jīng)門靜脈移植BMSCs入肝后，動態(tài)觀察BMSCs在肝臟分布情況，檢測術(shù)后不同時間點肝功能、肝細(xì)胞凋亡情況和凋亡相關(guān)蛋白，明確BMSCs是否對離體肝切除自體肝移植術(shù)后大鼠具有肝功能保護作用，并初步探討可能的機制，為臨床上離體肝切除自體肝移植聯(lián)合BMSCs移植治療提供參考價值，并為藥物分子靶向治療提供參考。
　　 研究方法: (

3、1)培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)并進行鑒定。(2)采用四氯化碳注射法建立SD大鼠肝纖維化模型。(3)建立SD大鼠離體肝切除自體肝移植動物模型，分別取正常組SD大鼠與輕度肝纖維化SD大鼠進行實驗，根據(jù)是否移植BMSCs，各將大鼠隨機分為假手術(shù)組(n=30)，BMSCs移植組(n=30)和對照組(n=30)。(4)分別于大鼠離體肝切除自體肝移植術(shù)后或假手術(shù)組術(shù)后12h、24h、48h、72h、168h時間點處死各組大鼠，觀察大

4、鼠術(shù)后早期存活率，檢測大鼠肝功指標(biāo)；在正常大鼠中，觀察BMSCs在肝臟動態(tài)分布情況，采用TUNEL法檢測各組間不同時間點的肝細(xì)胞凋亡情況，采用wb法檢測凋亡相關(guān)蛋白TGF-β1、bcl-2、bax在術(shù)后24h、72h、168h的相對表達情況；在輕度纖維化大鼠中，采用wb法檢測了凋亡相關(guān)蛋白TGF-β1、TGF-β R1、TGF-β R2、bcl-2、bax、p38、p-p38表達情況。
　　 結(jié)果: 成功建立肝纖維化大鼠模型和離

5、體肝切除自體肝移植動物模型，順利培養(yǎng)大鼠BMSCs并鑒定。在正常SD大鼠中，BMSCs移植組術(shù)后大鼠死亡率低于對照組，術(shù)后移植BMSCs的大鼠肝組織中均有GFP表達，并隨時間推移表達增多，BMSCs移植組術(shù)后12h、24h、48h、72h時間點ALT、AST等肝功指標(biāo)明顯好于對照組，肝細(xì)胞凋亡率低于對照組(p<0.05)，BMSCs移植組TGF-β1、bax水平較對照組減少，bcl-2較對照組增高，其中在術(shù)后24h、72h時間點bax下

6、調(diào)、bcl-2上調(diào)有顯著性差異(p<0.05)，而TGF-β1在24、72 h無顯著性差異。在肝纖維化SD大鼠中，BMSCs移植組術(shù)后12h、24h、48h、72h ALT、AST等肝功能指標(biāo)明顯好于對照組(p<0.05)，對該組進一步檢測發(fā)現(xiàn)BMSCs移植組TGF-β1、TGF-β R1、p38、p-p38、bax在12h、24h、48h、72h時間點較對照組顯著下降(p<0.05)，而bcl-2在12h、24h、48h、72h時間點

7、明顯升高(p<0.05)。
　　 結(jié)論: 首次創(chuàng)建了纖維化大鼠離體肝切除自體肝移植術(shù)的動物模型，為基礎(chǔ)研究提供研究平臺。BMSCs術(shù)中移植入肝能改善離體肝切除自體肝移植大鼠術(shù)后肝功能，提高術(shù)后大鼠存活率，為臨床上離體肝切除自體肝移植聯(lián)合BMSCs移植治療提供動物實驗參考。其可能通過影響bcl-2/bax值來減少肝細(xì)胞凋亡而改善肝功能，可能是通過TGF-β1/TGF-β R1、P38等相關(guān)的途徑完成的，為分子靶向治療及后續(xù)研究提供