比較兩種劑型亞甲基藍(lán)光敏劑介導(dǎo)的光動(dòng)力療法對(duì)糞腸球菌感染的抗菌效應(yīng).pdf

1、糞腸球菌（Enterococcus faecalis, E. faecalis）作為引起根管治療失敗的主要致病菌之一，具有較強(qiáng)的耐藥性和生存力，單純機(jī)械預(yù)備很難完全清除根管內(nèi)E. faecalis感染，且其對(duì)臨床常用根管消毒藥物反應(yīng)不敏感。因此，尋求一種有效對(duì)抗根管內(nèi)E.faecalis感染的新方法或輔助手段已成為滿足牙髓治療需要的必然趨勢(shì)。光動(dòng)力療法（Photodynamic Therapy, PDT）作為具有應(yīng)用前景的新型抗感染策略

2、之一，已在對(duì)抗全身感染性疾?。ㄈ缙つw感染及骨科感染）中取得良好進(jìn)展，故本研究擬探討其應(yīng)用于控制根管糞腸球菌感染的可行性。本研究首先通過體外實(shí)驗(yàn)觀察其對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞（Human Periodontal Ligament Fibroblasts, hPDLFs）的毒性作用考察其生物安全性，再利用菌落計(jì)數(shù)法及掃描電鏡（Scanning Electron Microscope, SEM）評(píng)估該療法對(duì)浮游狀態(tài)E.faecalis及根管感染模

3、型中細(xì)菌生物膜的抗菌性能，旨在探索PDT用于根管消毒的安全性和可行性。同時(shí)，本研究還觀察比較了兩種不同劑型MB介導(dǎo)的PDT，以及不同光照方式介導(dǎo)的PDT的抗菌效應(yīng)，從而分析影響PDT抗菌療效的相關(guān)因素。本文從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述。
　　實(shí)驗(yàn)一兩種劑型亞甲基藍(lán)光動(dòng)力療法對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的體外毒性研究
　　目的：研究?jī)煞N劑型MB介導(dǎo)的PDT對(duì)體外培養(yǎng)的hPDLFs的毒性作用。方法：將體外培養(yǎng)的hPDLFs分別加入兩種劑型MB

4、中（光敏劑終濃度分別為0.1，1.0，10，25，50μmol/L），孵育10min后，選擇波長(zhǎng)670nm半導(dǎo)體激光器照射5min，輸出功率40mW，光照能量為12J。光照結(jié)束后繼續(xù)培養(yǎng)24h，用噻唑藍(lán)（MTT）比色法計(jì)算細(xì)胞相對(duì)增殖率從而反映兩種劑型MB的細(xì)胞毒性，光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果：兩種劑型MB介導(dǎo)的PDT對(duì)體外培養(yǎng)的hPDLFs的毒性作用未見明顯差異（P>0.05）。當(dāng)MB濃度≤25μmol/L時(shí)，細(xì)胞毒性為1~2級(jí)，

5、光鏡下觀察細(xì)胞未發(fā)生明顯形態(tài)學(xué)改變；濃度≥50μmol/L時(shí)，細(xì)胞毒性為3級(jí)，可觀察到細(xì)胞皺縮、變圓。結(jié)論：PDT對(duì)hPDLFs的毒性作用受光敏劑濃度影響，適當(dāng)濃度的兩種劑型MB介導(dǎo)的PDT對(duì)體外培養(yǎng)的hPDLFs影響輕微。
　　實(shí)驗(yàn)二兩種劑型亞甲基藍(lán)光動(dòng)力療法對(duì)糞腸球菌的體外抗菌研究
　　目的：體外研究?jī)煞N劑型MB介導(dǎo)的PDT對(duì)浮游狀態(tài)E. faecalis的抗菌效應(yīng)。方法：以浮游狀態(tài)E.faecalis作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將濃

6、度為100μmol/L的兩種劑型MB孵育10min后，選擇波長(zhǎng)670nm半導(dǎo)體激光器照射5min，輸出功率為50mW，光照能量為15J。采用菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)兩種劑型MB介導(dǎo)的PDT對(duì)E.faecalis的殺傷作用。結(jié)果：水劑型MB和混合劑型MB介導(dǎo)的PDT對(duì)E.faecalis的抗菌率分別為99.976％和99.982%，二者相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；單獨(dú)光照組及暗毒性組對(duì)E. faecalis的殺傷作用不如PDT組（P<

7、0.05）。其中單獨(dú)光照組抗菌率為67.5%，暗毒性組抗菌率分別為71.69%（水劑型MB）和73.67%（混合劑型MB）。結(jié)論：兩種劑型MB介導(dǎo)的PDT對(duì)體外培養(yǎng)的E.faecalis具有明顯殺傷作用，且只有光源與光敏劑聯(lián)合使用方能達(dá)到最佳效應(yīng)。
　　實(shí)驗(yàn)三不同光照方式介導(dǎo)的光動(dòng)力療法對(duì)牛牙糞腸球菌根管感染模型的體外抗菌研究
　　目的：體外研究?jī)煞N不同光照方式介導(dǎo)的PDT對(duì)根管內(nèi)E.faecalis感染的抗菌效應(yīng)。方法：以

8、水劑型MB為光敏劑，將成功建立根管E. faecalis感染模型的18個(gè)牛牙樣本隨機(jī)分為2組每組9個(gè)樣本，分別采用不同光照方式進(jìn)行PDT處理即：光導(dǎo)纖維置于根管口照射及光導(dǎo)纖維置于根管內(nèi)距離根尖約1mm處照射。所有實(shí)驗(yàn)樣本均接受波長(zhǎng)為670 nm的半導(dǎo)體激光器照射5min，其輸出功率設(shè)置為50mW，光照能量15 J。于實(shí)驗(yàn)前、后分別取樣，即刻培養(yǎng)檢測(cè)根管內(nèi)E.faecalis數(shù)目，通過菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)兩種光照方式介導(dǎo)的 PDT對(duì)根管內(nèi) E

9、. faecalis感染的抗菌率。結(jié)果：光導(dǎo)纖維置于根管口照射和根管內(nèi)照射的抗菌率分別為95.23%和95.89%，二者相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：在相同光照參數(shù)條件下，PDT的抗菌效應(yīng)不受光導(dǎo)纖維在根管內(nèi)的位置影響。
　　實(shí)驗(yàn)四兩種劑型亞甲基藍(lán)光動(dòng)力療法對(duì)牛牙糞腸球菌根管感染模型的體外抗菌研究
　　目的：體外研究?jī)煞N劑型MB介導(dǎo)的PDT對(duì)根管內(nèi)E. faecalis感染的抗菌效應(yīng)。方法：建立牛牙根管E.

10、faecalis感染模型后，隨機(jī)將45個(gè)牛牙樣本分為5組每組9個(gè)樣本，分別采用不同消毒方法即：超聲沖洗組（2.5%NaOCl溶液）， PDT組（水劑型MB、混合劑型MB），超聲沖洗聯(lián)合PDT組（水劑型MB、混合劑型MB）。5組實(shí)驗(yàn)中，除超聲沖洗組外其余樣本均接受波長(zhǎng)為670nm的半導(dǎo)體激光器照射5min，輸出功率設(shè)置為50mW，光照能量15J。于根管消毒前、后取樣，即刻培養(yǎng)檢測(cè)根管內(nèi)E.faecalis數(shù)目；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每組隨機(jī)選取3個(gè)

11、樣本 SEM觀察根管牙本質(zhì)小管內(nèi)殘存細(xì)菌的形態(tài)。結(jié)果：5組實(shí)驗(yàn)中，超聲沖洗聯(lián)合PDT處理抗菌率最高，分別為99.96%（水劑型MB）和99.92%（混合劑型MB），其抗菌作用明顯優(yōu)于單獨(dú)水劑型MB介導(dǎo)的PDT組（抗菌率95.89%）（P<0.05），但與其他組相比較（單獨(dú)超聲沖洗組抗菌率99.46%，單獨(dú)混合劑型MB介導(dǎo)的PDT組抗菌率98.3%），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。SEM觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)不同方法消毒處理后實(shí)驗(yàn)組絕大多數(shù)細(xì)菌均