干性基因Nanog在膀胱癌干細(xì)胞干性維持中的作用研究.pdf

1、膀胱癌是我國男性泌尿生殖系統(tǒng)發(fā)病率最高的惡性腫瘤,具有對(duì)放化療耐受以及治療后易復(fù)發(fā)等特點(diǎn),因此,我們需要尋找膀胱腫瘤新的治療策略。腫瘤干細(xì)胞在多種腫瘤中的相繼發(fā)現(xiàn)為我們研究膀胱腫瘤發(fā)生、發(fā)展以及治療提供了嶄新的研究視角。研究表明,腫瘤干細(xì)胞具有自我更新和多向分化潛能,其中腫瘤干細(xì)胞可以通過對(duì)稱分裂和不對(duì)稱分裂,形成與母細(xì)胞性質(zhì)和功能完全一致的子代細(xì)胞,維持其自我更新;腫瘤干細(xì)胞中存在的突變可通過自我更新在細(xì)胞中代代相傳,保持腫瘤細(xì)干胞的

2、致瘤性。這說明自我更新是腫瘤干細(xì)胞致瘤的重要原因之一。
　　干細(xì)胞的自我更新受到多種途徑調(diào)節(jié),干性基因在其自我更新中起重要作用,包括Oct4,Sox2和Nanog等轉(zhuǎn)錄因子,通過激活某些關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄,從而調(diào)控細(xì)胞增殖與分化的平衡,維持干細(xì)胞的未分化狀態(tài)。其中Nanog是最近鑒定的維持未分化胚胎細(xì)胞多能性和自我更新的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,在多種腫瘤中異常表達(dá),其高表達(dá)可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖能力,且常伴隨不良預(yù)后。這提示Nanog可通過維持

3、腫瘤干細(xì)胞的自我更新能力導(dǎo)致腫瘤發(fā)生,促進(jìn)腫瘤發(fā)展。在膀胱癌干細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn),膀胱癌干細(xì)胞同樣具有較強(qiáng)自我更新能力,并且伴隨Nanog的表達(dá)升高,提示我們Nanog可能參與了膀胱癌干細(xì)胞的干性維持。
　　目前關(guān)于Nanog在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展中的作用尚不明確,為了研究Nanog在膀胱癌干細(xì)胞干性維持中的作用,我們首先采用Western Blot和免疫組化方法檢測(cè)Nanog蛋白在膀胱癌干細(xì)胞和46例膀胱癌組織中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)Nanog

4、在膀胱癌干細(xì)胞和組織中均為高表達(dá),且其表達(dá)與組織的病理分級(jí)呈正相關(guān);為深入探討Nanog在膀胱癌細(xì)胞中的作用,我們利用慢病毒載體,構(gòu)建了穩(wěn)定高表達(dá)外源Nanog的膀胱癌T24和5637細(xì)胞株;進(jìn)一步通過平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察Nanog對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖的作用,采用懸浮成球技術(shù)檢測(cè)Nanog對(duì)膀胱癌細(xì)胞自我更新能力的影響,選取化療藥物順鉑,利用克隆形成實(shí)驗(yàn)和MTT法檢測(cè)Nanog對(duì)膀胱癌細(xì)胞耐藥性的影響,運(yùn)用裸鼠移植瘤模型分析Nanog在膀胱

5、癌細(xì)胞致瘤性中所起作用,結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,高表達(dá)Nanog的T24和5637細(xì)胞克隆形成率上升,懸浮成球能力增強(qiáng),對(duì)順鉑的敏感性降低,以及體內(nèi)成瘤能力增強(qiáng)。
　　本研究首次報(bào)道了Nanog在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展中的表達(dá)變化,并從腫瘤干細(xì)胞特性角度探討Nanog與膀胱癌干細(xì)胞的干性維持的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)Nanog通過影響膀胱癌細(xì)胞的增殖,自我更新,耐藥性和致瘤性,促進(jìn)膀胱癌干細(xì)胞的干性維持。為闡明Nanog基因與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系以及