多因素聯(lián)合基因治療對H22實體瘤生長抑制作用的初步探討.pdf

1、目的:本文擬采用pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA3.1-TNF-α、pcDNA3.1-CXCL-1和pcDNA3.1-CH510治療質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠H22細胞,探討不同濃度,不同組合的治療方案對H22實體瘤生長的抑制作用,尋求治療H22實體瘤的最佳治療方案。
　　方法:(1)以H22肝癌細胞接種于BALB/c小鼠右后腿肌肉內(nèi),建立實驗性小鼠腫瘤模型。(2)采用裸質(zhì)粒DNA原位注射法讓質(zhì)粒pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA

2、3.1-TNF-α、pcDNA3.1-CXCL-1和pcDNA3.1-CH510在腫瘤原位表達相應的產(chǎn)物IFN-β、TNF-α、CXCL-1、CH50。(3)采用裸質(zhì)粒DNA尾靜脈注射法實現(xiàn)荷瘤鼠肝內(nèi)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-IFN-β進行基因治療。(4)通過比較腫瘤瘤重觀察不同組別治療方案的效果。(5)評估出各種基因的最適濃度后,將各種基因進行聯(lián)合治療荷瘤小鼠,觀察聯(lián)合治療方案中腫瘤生長抑制率與單獨每個基因的腫瘤生長抑制率,評價聯(lián)合治

3、療的效果。
　　結(jié)果:(1)pcDNA3.1-IFN-β質(zhì)粒分別通過腫瘤接種原位肌肉注射和尾靜脈注射,濃度設置為50μg/100μl,100μg/100μl,200μg/100μl,結(jié)果顯示尾靜脈注射100μg/100μl為合適的治療方案,既對腫瘤的生長有明顯的抑制作用(40％左右),同時毒副作用較小。(2)pcDNA3.1-TNF-α質(zhì)粒通過腫瘤接種原位肌肉注射,濃度設置為10μg/100μl,30μg/100μl,50μg/1

4、00μl,100μg/100μl,結(jié)果顯示最適治療方案為腫瘤接種原位肌肉注射10μg,抑制腫瘤生長率為70%。(3)pcDNA3.1-CXCL-1質(zhì)粒肌肉注射于腫瘤接種原位,濃度設置為5μg/100μl,10μg/100μl,30μg/100μl,50μg/100μl,100μg/100μl實驗結(jié)果顯示10μg/100μl即可抑制腫瘤生長40%左右。(4)將pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA3.1-TNF-α、pcDNA3.1-C

5、XCL-1三種質(zhì)粒聯(lián)合對荷瘤鼠進行治療,可以得到比單獨使用任何一種基因治療都強的抑制效果,腫瘤生長抑制率能夠達到80%。(5)在以上三種質(zhì)粒聯(lián)合治療的基礎上,我們另加入50μg的pcDNA3.1-CH510質(zhì)粒注射到腫瘤接種部位,聯(lián)合運用于H22腫瘤模型中進行治療,可觀察到腫瘤生長抑制在90%以上,甚至治療組內(nèi)部分小鼠腫瘤接種部位根本觸摸不到腫瘤的生長。
　　結(jié)論:將多種具有抗癌效果的細胞因子的基因以小劑量,多種方式組合在一起對腫