靶向COX-2的shRNA對大鼠肝星狀細(xì)胞Ccl2、Phlda3、Aldoc、Car9基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　研究靶向COX-2的shRNA對大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡、脂質(zhì)代謝相關(guān)基因Ccl2、Phlda3、Aldoc、Car9表達(dá)的影響，同時驗證前期基因芯片結(jié)果。
　　方法：
　　1、實驗分為三組：空白對照組、HK空載體組、COX-2shRNA1實驗組。
　　2、利用構(gòu)建的pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2 shRNA1，然后將其轉(zhuǎn)染至大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)，最后在熒光顯微鏡下評估轉(zhuǎn)染效率。

2、r>　　3、利用RT-PCR技術(shù)分別檢測轉(zhuǎn)染24h,48h,72h后各組Ccl2, Phlda3, Aldoc, Car9mRNA的表達(dá)情況。
　　4、對照前期基因芯片結(jié)果對比分析各基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、熒光顯微鏡下可見，COX-2shRNA1在轉(zhuǎn)染大鼠HSC24h,48h及72h后，細(xì)胞質(zhì)中見綠色熒光，各組轉(zhuǎn)染效率有所差異。
　　2、不同組別大鼠肝星狀細(xì)胞 COX-2表達(dá)情況：在轉(zhuǎn)染24h,48

3、h及72h后， COX-2mRNA在 COX-2shRNA1組中的表達(dá)低于空白組和空載體組(P<0.05)，其中以COX-2shRNA1在轉(zhuǎn)染后72h最明顯。
　　3、不同組別大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)情況：在轉(zhuǎn)染24 h,48 h及72 h后，COX-2shRNA1組中凋亡相關(guān)基因Ccl2表達(dá)下降、Phlda3表達(dá)上升(P<0.05)，且以72h最明顯，空白組及空載體組表達(dá)無明顯差異。
　　4、不同組別大鼠肝星狀細(xì)胞脂

4、代謝相關(guān)基因表達(dá)情況：在轉(zhuǎn)染24 h,48 h及72 h后， COX-2shRNA1組中脂代謝相關(guān)基因 Aldoc, Car9表達(dá)下降(P <0.05)，且以72h最明顯，空白組及空載體組表達(dá)無明顯差異。
　　5、對照基因芯片結(jié)果可知，Phlda3, Aldoc, Car9在本實驗中表達(dá)情況與基因芯片結(jié)果一致，而Ccl2的表達(dá)情況與基因芯片結(jié)果相反。
　　結(jié)論：
　　1、靶向COX-2的shRNA可以沉默大鼠