COX-2對(duì)HSC-T6細(xì)胞中Acsl家族相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　研究COX-2對(duì)HSC-T6細(xì)胞中Acsl家族相關(guān)基因表達(dá)的影響，明確COX-2調(diào)節(jié)HSC-T6細(xì)胞脂類代謝的作用環(huán)節(jié)。
　　方法：
　　1、實(shí)驗(yàn)分組：HSC-T6細(xì)胞組（空白組），pYr-1.1-COX-2 shRNA組（COX-2 shRNA組）；pYr-1.1-NC組（空載體組）。
　　2、將構(gòu)建好的pYr-1.1-COX-2 shRNA及pYr-1.1-NC分別轉(zhuǎn)染至HSC-T6細(xì)胞中，并于轉(zhuǎn)

2、染后48小時(shí)用熒光倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率。
　　3、利用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞內(nèi)COX-2、Acsl1、Acsl3、Acsl4、Acsl5、Acsl6基因表達(dá)情況。
　　4、根據(jù)Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)果，選取Acsl家族中有意義的基因，再利用Western Blot技術(shù)檢測(cè)HSC-T6細(xì)胞中Acsl家族相關(guān)基因的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞48小時(shí)后

3、，在熒光倒置顯微鏡下可見細(xì)胞質(zhì)中分布著綠色熒光，且轉(zhuǎn)染效率達(dá)75％以上。
　　2、HSC-T6細(xì)胞不同組別中COX-2 mRNA表達(dá)情況：COX-2 mRNA在COX-2 shRNA組中表達(dá)低于空白組和空載體組，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著意義(p＜0.05)。
　　3、HSC-T6細(xì)胞不同組別中Acsl家族相關(guān)基因 mRNA表達(dá)情況：COX-2 shRNA組中Acsl6 mRNA表達(dá)較空白組及空載體組明顯增加，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著意義(p

4、＜0.05)，但Acsl1、Acsl3、Acsl4、Acsl5mRNA表達(dá)變化不大，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。
　　4、HSC-T6細(xì)胞不同組別中Acsl6蛋白質(zhì)表達(dá)情況：COX-2 shRNA組中Acsl6蛋白質(zhì)表達(dá)較空白組及空載體組明顯增加，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、靶向COX-2的shRNA可以明顯沉默HSC-T6細(xì)胞中COX-2的表達(dá)。
　　2、在大鼠HSC-T6細(xì)