COX-2對脂變BRL-3A肝細胞甘油三酯代謝的影響及Acsl1、Acsl6表達的調節(jié).pdf

1、目的：研究COX-2對脂變肝細胞BRL-3A株甘油三酯代謝及Acsl1、Acsl6表達的影響。
　　方法：
　　(1)篩選最佳誘導濃度，誘導細胞脂肪變性：體外培養(yǎng)大鼠肝細胞BRL-3A株，不同濃度醫(yī)用脂肪乳誘導大鼠肝細胞成脂肪變肝細胞，油紅O染色及蘇木素復染方法觀察各組細胞脂肪變狀態(tài)，MTT檢測細胞增殖活性及 ELISA檢測誘導前后細胞內TG含量確定最佳誘導濃度。
　　(2)實驗分為正常BRL-3A組、脂變BRL-3A

2、組，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組，pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組，pcDNA3.1（+）-r-COX-2組，pcDNA3.1（+）-r-HK組，尼美舒利（200ug/ml）陽性對照組，除正常BRL-3A組外，其余各組均以最佳誘導濃度6％脂肪乳培養(yǎng)24h后，瞬時轉染各組對應的質粒，ELISA檢測轉染后各組細胞內TG含量，RT-PCR檢測各組COX-2mRNA、Acsl1mRNA、Acsl6mRNA的表

3、達。
　　結果：（1）醫(yī)用脂肪乳培養(yǎng)細胞24h誘導細胞脂變，油紅染色示肝細胞內空泡脂滴增加，提示細胞脂肪變。ELISA結果表明細胞內TG含量增加。結合油紅染色、MTT檢測的OD值及ELISA結果確定本實驗最佳誘導濃度為6%醫(yī)用脂肪乳。
　?。?）pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA轉染至脂變BRL-3A細胞培養(yǎng)24h后熒光顯微鏡下觀察，細胞質中可見綠色熒光，轉染效率達70%以上。
　?。?）ELISA

4、檢測轉染后各組細胞內TG含量，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組與尼美舒利組TG含量均減少(p<0.05)，以pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組減少明顯，均低于其余6組(p<0.01)，而pcDNA3.1（+）-r-COX-2組高于其余6組(p<0.05)。尼美舒利組低于pcDNA3.1（+）-r-COX-2組但高于pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組，pYr-1.1-hU

5、6-EGFP-HK組和pcDNA3.1（+）-r-HK組無明顯變化，無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。
　　（4）7個組別 COX-2、Acsl1、Acsl6基因表達情況：COX-2mRNA表達情況：與正常肝細胞組相比，脂變肝細胞組中COX-2mRNA表達增高(p<0.05)。與脂變肝細胞組相比， pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA組及尼美舒利組中COX-2mRNA表達降低(p<0.05)，以pYr-1.1-hU6

6、-EGFP-COX-2shRNA組降低明顯(p<0.01)，而pcDNA3.1（+）-r-COX-2組中COX-2mRNA表達增高(p<0.05)。pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組和pcDNA3.1（+）-r-HK組COX-2mRNA無明顯增高，無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。脂代謝基因 Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表達情況：與正常肝細胞組相比，脂變肝細胞中Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表達增高(p<0.05)。

7、與脂變肝細胞組相比， pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA及尼美舒利組中Acsl1mRNA、Acsl6mRNA表達均降低(p<0.05)。以pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2sh RNA組下調明顯(p<0.01)，pcDNA3.1（+）-r-COX-2組中Acsl1、Acsl6表達則明顯增高(p<0.05)。而 pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組和pcDNA3.1（+）-r-HK組中Acsl1mRNA、