Matriptase和HAI-1與子宮內膜癌細胞侵襲遷移及順鉑療效判斷的相關性研究.pdf

1、目的：
　　檢測Matriptase和HAI-1基因在三株子宮內膜癌細胞株中的表達情況，探討Matriptase和HAI-1表達水平與子宮內膜癌細胞株侵襲遷移能力及細胞凋亡情況的相關性。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人子宮內膜癌細胞株，采用Real-time qPCR和Western blot技術檢測HEC-1A、HEC-1B和RL952三株子宮子宮內膜癌細胞中Matriptase、HAI-1 mRNA和蛋白表達水平；構建

2、Matriptase基因SiRNA慢病毒載體，采用RNA干擾技術，對Matriptase高表達的HEC-1A和RL952細胞進行瞬時轉染，從而達到抑制Matriptase基因表達水平的目的，并應用細胞劃痕實驗及穿膜小室實驗，觀察干擾前后癌細胞體外侵襲及遷移能力的改變。采用Real-time qPCR及Western blot技術，檢測不同濃度順鉑作用下Matriptase和HAI-1表達水平的改變；并采用細胞劃痕實驗及穿膜小室實驗測定其

3、侵襲遷移能力的改變，流式細胞儀監(jiān)測順鉑對腫瘤細胞增殖的影響。
　　結果：
　　1.Matriptase mRNA在HEC-1A、HEC-1B和RL952細胞的相對表達量分別為（0.2123±0.021）、（6.95E-4±1.2E-4）和（0.1778±0.013），HAI-1mRNA在三株細胞中的相對表達量分別為（0.2827±0.049）、（0.0263±0.0043）和（0.2420±0.032）；Matriptase

4、和HAI-1蛋白在HEC-1A和RL952中均呈陽性表達，但二者在HEC-1B中均為陰性表達或低于可測水準，與mRNA水平相吻合。
　　2.采用Matriptase基因SiRNA慢病毒載體（Ma-SiRNA-89873）建立Matriptase低表達組（Knock down，KD），以加入正常培養(yǎng)基和陰性慢病毒載體NO53分別為空白對照組（Control，CON）和陰性對照組（Negative control，NC）。KD組 Ma

5、triptase mRNA表達水平顯著下調（HEC-1A：0.2157±0.0124 vs0.0358±0.0111；RL952：0.1849±0.0053 vs0.0341±0.0017），抑制率分別達到83.4％和81.5%。KD組 HAI-1 mRNA表達較 CON組均有略微上調（HEC-1A：0.3142±0.0277 vs0.2900±0.0292；RL952：0.2829±0.0021 vs0.2611±0.0192），但差

6、異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。Matriptase和HAI-1蛋白水平改變情況與mRNA水平相一致。
　　3.細胞劃痕實驗結果顯示，HEC-1A CON、KD和NC組遷移距離分別為（206.67±28.38）μm、（79.2±6.82）μm和（197.96±16.83）μm；RL952 CON CON、KD89873和NC組遷移距離分別為（184.57±21.97）μm、（76.8±5.48）μm和（175.34±14.73）μ

7、m；P（CON vs KD89873）＜0.001，P（CON vs NC）＞0.05。Person相關性分析顯示，Matriptase mRNA表達水平與遷移距離呈正相關（rHEC-1A=0.97，rRL952=0.982）。
　　4.腫瘤細胞侵襲實驗結果顯示，與 CON組相比，KD組穿膜細胞數(shù)顯著減少（HEC-1A：139.25±12.3112 vs48.6±4.8496；RL952：150±7.0710 vs53.3±5.6

8、376），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），NC組穿膜細胞數(shù)為（HEC-1A：132±8.3120；RL952：145±6.0711），差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。Person相關性分析顯示，Matriptase mRNA表達水平與穿膜細胞數(shù)亦呈正相關（rHEC-1A=0.975，rRL952=0.994）。
　　5. Real-time qPCR結果顯示，不同濃度順鉑處理后Matriptase mRNA表達水平均表現(xiàn)為低濃

9、度組表達水平增高（P＜0.05），高濃度組表達水平降低（P＜0.05）；HEC-1A和RL952細胞實驗組中HAI-1 mRNA表達水平呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢；HEC-1B細胞實驗組中HAI-1 mRNA表達水平呈下降趨勢。各實驗組Matriptase和HAI-1蛋白表達水平的改變與mRNA相吻合。
　　6.細胞劃痕實驗結果顯示，三株子宮內膜癌細胞不同濃度組改變趨勢相一致，即低濃度組子宮內膜癌細胞遷移距離較空白株明顯增寬（P＜0.

10、05），高濃度遷移距離顯著縮短（P＜0.05）。
　　7.腫瘤細胞侵襲實驗結果顯示，三株子宮內膜癌細胞不同濃度組改變趨勢相一致，即低濃度組子宮內膜癌細胞穿膜細胞數(shù)較空白株增多（P＜0.05），中濃度和高濃度組穿膜細胞數(shù)顯著減少（P＜0.05）。
　　8.流式細胞儀監(jiān)測結果顯示，HEC-1A細胞濃度組（0、2、10、50 mg/L DDP）細胞存活率分別為84.4%、82.8%、75.0%和41.4%；HEC-1B細胞濃度組（

11、0、2、10、50 mg/L DDP）細胞存活率分別為76.9%、73.5%、65.6%和31.8%；RL952細胞濃度組（0、1、2、5 mg/L DDP）細胞存活率分別為89.4%、86.3%、65.8%和31.1%；單因素方差分析，三組實驗組組內差異均有統(tǒng)計學意義（FHEC-1A=34.548，PHEC-1A＜0.001;FHEC-1B=64.141，PHEC-1B＜0.001;FRL952=115.043，P RL952＜0.0

12、01），兩兩方差分析：PHEC-1A（0 mg/L vs2 mg/L）=0.418，PHEC-1B（0 mg/L vs2 mg/L）=0.412，P RL952（0 mg/L vs1 mg/L）=0.418，余P值均小于0.05。
　　結論：
　　1.應用RNAi技術，特異性下調Matriptase基因表達水平，子宮內膜癌細胞的侵襲遷移能力明顯受限，可見Matriptase表達水平與子宮內膜癌細胞侵襲遷移能力密切相關。