子宮內膜異位癥體外細胞共培養(yǎng)模型的建立及細胞遷移和侵襲的研究.pdf

1、研究背景
　　 子宮內膜異位癥是一種育齡婦女多發(fā)病，近年來發(fā)病率呈上升趨勢，其病變廣泛，形態(tài)多樣，到目前為止發(fā)病機制不清，具有侵襲、遠處轉移、復發(fā)等惡性生物學行為，治療對策有限。
　　 模型的建立對疾病發(fā)病機制的研究是一種重要手段，在對內異癥的研究中，盡管已成功構建了很多模型，但仍然存在一些不足，最理想的動物模型來自獼猴和狒狒等靈長類動物，但其來源稀缺、價格昂貴，應用受到了很大限制。而大多數(shù)動物模型所選擇的嚙齒類動物和兔

2、等無周期性月經(jīng)，不發(fā)生子宮內膜異位癥，用其構建內異癥模型似乎并不合理。在細胞模型的建立上，單種細胞的培養(yǎng)無法模擬體內多細胞共同作用的模式，而體外多細胞共培養(yǎng)的方法也十分有限，Transwell是應用最為廣泛的一種方法，但其無法對兩種細胞的作用過程進行實時觀察。
　　 本研究與中國科學院國家納米科學中心合作，該中心應用微流控技術與表面化學技術已成功構建了體外多細胞共培養(yǎng)體系，能在同一表面控制不同種細胞有序粘附，對多種細胞的微觀生物

3、學行為進行觀察。然而目前該模型在生物學方面的應用未見報道。將該模型應用于子宮內膜異位癥體外細胞共培養(yǎng)模型的研究中，可以觀察子宮內膜基質細胞與腹膜間皮細胞之間粘附、侵襲的發(fā)生過程，從而可以在體外模擬逆流的經(jīng)血中子宮內膜基質細胞進入腹腔后內異癥發(fā)病的過程，對進一步闡釋子宮內膜異位癥的發(fā)病機制有重要的意義
　　 研究目的
　　 1、建立子宮內膜異位癥子宮內膜基質細胞、腹膜間皮細胞體外共培養(yǎng)模型。
　　 2、應用該模型，

4、觀察內異癥患者（研究組）及非內異癥患者（對照組）子宮內膜基質細胞與腹膜間皮細胞交叉共培養(yǎng)后，細胞運動、遷移及侵襲的微觀行為，比較細胞共培養(yǎng)后行為的差異。
　　 3、實時觀塞細胞共培養(yǎng)后相互作用的過程
　　 方法：
　　 1、取組織分離培養(yǎng)原代子宮內膜基質細胞和腹膜間皮細胞
　　 2、設計制備PDMS印章
　　 3、利用雙孔道同時接種同一種細胞，進行愈合實驗分別觀察內異癥及非內異癥患者子宮內膜基質細

5、胞、腹膜間皮細胞運動的差異。
　　 4、內異癥及非內異癥子宮內膜基質細胞和腹膜間皮細胞交叉共培養(yǎng)并免疫熒光標記，每24小時拍照，比較兩組細胞行為差異。
　　 5、顯微鏡實時監(jiān)測共培養(yǎng)體系中兩細胞相互作用的過程。
　　 6、嘗試應用建立的模型探討17β雌二醇、孕酮、Triptorelin對子宮內膜基質細胞及與腹膜間皮細胞共培養(yǎng)后細胞運動的影響。
　　 結果：
　　 1、當孔道寬、高300μm時，孔道

6、間距500μm，子宮內膜基質細胞密度5×106/1、腹膜間皮細胞3×105/1時在孔道內生長良好，2小時可貼壁牢固，揭膜后圖案化好。
　　 2、模型設計當愈合孔道寬度600μm時，子宮內膜基質細胞93小時兩細胞條帶可完全愈合，在內異癥組及非內異癥組無明顯差異；腹膜問皮細胞24小時已完全愈合，運動速度快于子宮內膜基質細胞。
　　 3、內異癥患者子宮內膜基質細胞和腹膜間皮細胞共培養(yǎng)后，基質細胞向腹膜間皮細胞遷移，使腹膜間皮細

7、胞數(shù)量減少，甚至消失
　　 4、內異癥患者子宮內膜基質細胞與非內異癥患者腹膜間皮細胞共培養(yǎng)，腹膜間皮細胞向基質細胞方向遷移，基質細胞數(shù)量逐漸減少
　　 5、非內異癥患者子宮內膜基質細胞與內異癥患者腹膜間皮細胞共培養(yǎng)，基質細胞同樣可以使腹膜間皮細胞減少消失
　　 6、非內異癥患者子宮內膜基質細胞與腹膜間皮細胞共培養(yǎng)，兩細胞各自生長，未觀察到侵襲現(xiàn)象
　　 7、17β雌二醇濃度為5nM及10nM，Tripto

8、relin濃度為5×10-7g/ml時子宮內膜基質細胞運動距離與對照組有統(tǒng)計學差異；孕酮對子宮內膜基質細胞運動無影響。17β雌二醇濃度為10nM時，可加快子宮內膜基質細胞與腹膜間皮細胞共培養(yǎng)后細胞運動速度。
　　 結論：
　　 1、本課題應用微流控技術成功建立了子宮內膜異位癥體外細胞共培養(yǎng)模型。能在細胞學水平對兩細胞作用過程進行實時觀察。
　　 2、通過研究組、對照組了富內膜基質細胞和腹膜間皮細交叉共培養(yǎng)得出子宮