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1、抗腫瘤血管形成已成為腫瘤生物治療的一種策略,其中以血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)作為靶分子的抗腫瘤研發(fā)取得了很大進(jìn)展。本實(shí)驗(yàn)用RT-PCR從鵪鶉胚胎中擴(kuò)增出鵪鶉VEGF(qVEGF)cDNA,將其亞克隆入GST融合表達(dá)載體pGEX-4T-2,用重組質(zhì)粒pGEX4T2-qVEGF轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)菌株,用IPTG誘導(dǎo)重組菌,通過(guò)Ni-NTAAgarose親合層析純化
2、和SDS-PAGE鑒定表達(dá)產(chǎn)物。純化產(chǎn)物經(jīng)透析復(fù)性后,用Westernblot鑒定其抗原性。將C57BL/16J小鼠隨機(jī)分為qVEGF-GST免疫組、qVEGF免疫組和生理鹽水對(duì)照組(NS),將重組抗原與等體積弗氏佐劑混合,分別于0、2、3周經(jīng)皮下多點(diǎn)注射,隨后接種Lewis肺癌細(xì)胞,觀察腫瘤的生長(zhǎng)情況和小鼠狀態(tài)。在接種18天后處死小鼠,剝離腫瘤稱重,檢測(cè)小鼠血清中抗VEGF抗體的滴度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:成功克隆了預(yù)期的55
3、5bpqVEGF序列,構(gòu)建的原核表達(dá)載體pGEX4T2-qVEGF能在大腸桿菌中高效表達(dá)qVEGF-GST融合蛋白,純化產(chǎn)物的純度大于81%,經(jīng)透析復(fù)性后可溶性蛋白的收率為59%,Westernblot鑒定證明具有抗原性;qVEGF-GST免疫組,qVEGF免疫組和生理鹽水對(duì)照組的腫瘤均重分別為2.29±0.429g、2.95±0.510g和3.37±0.021g,其中qVEGF-GST免疫組的腫瘤重量明顯小于生理鹽水對(duì)照組(P<0.0
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