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文檔簡介
1、抗腫瘤血管形成已成為腫瘤生物治療的一種策略，其中以血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)作為靶分子的抗腫瘤研發(fā)取得了很大進展。本實驗用RT-PCR從鵪鶉胚胎中擴增出鵪鶉VEGF(qVEGF)cDNA，將其亞克隆入GST融合表達載體pGEX-4T-2，用重組質(zhì)粒pGEX4T2-qVEGF轉化大腸桿菌BL21(DE3)菌株，用IPTG誘導重組菌，通過Ni-NTAAgarose親合層析純化
2、和SDS-PAGE鑒定表達產(chǎn)物。純化產(chǎn)物經(jīng)透析復性后，用Westernblot鑒定其抗原性。將C57BL/16J小鼠隨機分為qVEGF-GST免疫組、qVEGF免疫組和生理鹽水對照組(NS)，將重組抗原與等體積弗氏佐劑混合，分別于0、2、3周經(jīng)皮下多點注射，隨后接種Lewis肺癌細胞，觀察腫瘤的生長情況和小鼠狀態(tài)。在接種18天后處死小鼠，剝離腫瘤稱重，檢測小鼠血清中抗VEGF抗體的滴度。
實驗結果表明:成功克隆了預期的55
3、5bpqVEGF序列，構建的原核表達載體pGEX4T2-qVEGF能在大腸桿菌中高效表達qVEGF-GST融合蛋白，純化產(chǎn)物的純度大于81％，經(jīng)透析復性后可溶性蛋白的收率為59％，Westernblot鑒定證明具有抗原性;qVEGF-GST免疫組，qVEGF免疫組和生理鹽水對照組的腫瘤均重分別為2.29±0.429g、2.95±0.510g和3.37±0.021g，其中qVEGF-GST免疫組的腫瘤重量明顯小于生理鹽水對照組(P＜0.0
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