腎上腺素能系統(tǒng)參與慢性胰腺炎疼痛的分子機制研究.pdf

1、目的：
　　1.探究P2X3受體在三硝基苯磺酸（TNBS）誘導的慢性胰腺炎疼痛中的作用；
　　2.探討去甲腎上腺素（NE）及其受體在調(diào)節(jié)胰腺特異性神經(jīng)元中P2X3受體表達和功能中的作用特征。
　　方法：
　　1.對180-200g雄性 SD大鼠的胰管注射 TNBS從而建立大鼠的慢性胰腺炎（Chronic Pancreatitis，CP）模型。運用VFF方法評測CP大鼠的痛行為反應。
　　2.胰腺壁注射熒光素

2、（DiI）標記胰腺特異性背根節(jié)（DRG）神經(jīng)元，運用全細胞膜片鉗方法研究CP大鼠中胰腺相關DRG神經(jīng)元ATP電流及ATP誘發(fā)的動作電位的變化特性。
　　3.運用Western Blotting方法檢測CP模型大鼠胰腺相關DRG神經(jīng)元中P2X3受體蛋白表達情況。
　　4.運用ELISA的方法檢測血液中去甲腎上腺素（NE）的水平，運用免疫組化的方法檢測胰腺相關神經(jīng)元P2X3，NEβ2受體的表達情況。
　　5.運用鈣成像的方

3、法檢測去甲腎上腺素（NE）對ATP誘發(fā)的鈣信號的調(diào)節(jié)作用。
　　結果
　　1.P2X受體拮抗劑Suramin，P2X2，P2X3受體拮抗劑A317491明顯翻轉(zhuǎn)了CP大鼠的胰腺痛覺過敏。
　　2.與對照組相比，CP增加了胰腺相關DRG（T9-T13）中P2X3受體的蛋白表達量，而P2X2，P2X1受體的蛋白表達量并沒有發(fā)生變化。
　　3.給 CP大鼠腹腔連續(xù)7天注射去甲腎上腺素β受體的非選擇性拮抗劑（Propra

4、nolol，PROP）翻轉(zhuǎn)了胰腺相關DRG（T9-T13）中P2X3受體蛋白的高表達，而連續(xù)7天注射去甲腎上腺素α受體的非選擇性拮抗劑（Phentolamine，PHEN）并沒有翻轉(zhuǎn)胰腺相關DRG（T9-T13）中P2X3受體蛋白的高表達。
　　4.與對照組相比，CP增加了胰腺相關DRG（T9-T13）中NEβ2受體的蛋白表達量，而大鼠血清中NE的水平并沒有發(fā)生變化。
　　5.全細胞膜片鉗記錄顯示，與正常組相比，CP大鼠胰腺

5、相關 DRG神經(jīng)元ATP電流的電流密度顯著增大，ATP能夠誘發(fā)動作電位的細胞數(shù)量明顯的增多。
　　6.全細胞膜片鉗記錄顯示，與生理鹽水組相比，注射NEβ受體非選擇性拮抗劑組的大鼠胰腺相關DRG神經(jīng)元ATP電流的電流密度顯著減小，ATP能夠誘發(fā)的動作電位的細胞數(shù)量明顯的減少。
　　7.在正常大鼠的胰腺相關的DRG（T9-T13）上，NE能顯著增強ATP誘導的鈣信號。
　　8.PKA的抑制劑H-89抑制了去甲腎上腺素對AT

6、P反應的增強作用，而PKA的激動劑Forskolin則模擬了NE對ATP誘發(fā)的鈣信號的增強作用。
　　9.給CP大鼠腹腔注射去甲腎上腺素β受體的非選擇性拮抗劑（Propranolol，PROP）翻轉(zhuǎn)了CP大鼠的痛覺過敏，而注射去甲腎上腺素α受體的非選擇性拮抗劑（Phentolamine，PHEN）并沒有翻轉(zhuǎn)CP大鼠的痛覺過敏。
　　結論：
　　慢性胰腺炎激活了去甲腎上腺素能系統(tǒng)，通過大鼠初級感覺神經(jīng)元的β受體，調(diào)節(jié)了胰