厄貝沙坦對(duì)大鼠急性心肌梗死后血清內(nèi)皮素-1和腦鈉肽的影響及二者動(dòng)態(tài)變化的研究.pdf

1、目的:隨著人類生活方式的改變,冠心病現(xiàn)已成為危害人類健康的主要疾病之一。急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)發(fā)生后,心臟的收縮和舒張功能受到損害,進(jìn)一步惡化則會(huì)出現(xiàn)心力衰竭,是造成死亡的主要因?yàn)?。近年?研究發(fā)現(xiàn)心肌梗死后神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的激活,在其向心衰發(fā)展過程中起到了重要的作用,其特征為交感神經(jīng)(Sympathetic nervous system,SNS)和腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(Re

2、nin—angiotensin—aldosterone-system,RAAS)激活、腦鈉肽(Brainnatriuretic peptides,BNP)激活、細(xì)胞激素與免疫網(wǎng)絡(luò)激活以及一系列旁分泌-自分泌反應(yīng)激活。神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)適度激活在短期可以維持循環(huán)與重要器官的灌注,過度激活或長(zhǎng)期活性增高則助長(zhǎng)心肌重構(gòu)和心室重塑持續(xù)進(jìn)行、心室前、后負(fù)荷增高,最終導(dǎo)致心力衰竭發(fā)生。因此,探討急性心肌梗死后神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)激活和演變規(guī)律,對(duì)于心肌梗死的

3、積極診治及預(yù)防具有重要的意義。厄貝沙坦(Irbesartan,Irb)作為血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ receptor,AngⅡ)受體拮抗藥,已經(jīng)證實(shí)其選擇性與AngⅡ受體中的1型(AT1)結(jié)合,阻斷AngⅡ介導(dǎo)的血管收縮、水鈉潴留及醛固酮分泌等,能有效地抑制RASS的激活所帶來的心肌細(xì)胞增生,能夠延遲或逆轉(zhuǎn)心室重塑,明顯縮小心衰后增大的心腔,進(jìn)而提高左室射血分?jǐn)?shù),改善心功能。作為神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中重要的成員的BNP和內(nèi)皮功能

4、在AMI中有重要而又獨(dú)特的作用。本研究旨在通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)了解AngⅡ受體拮抗藥Irb對(duì)AMI后大鼠血漿中內(nèi)皮素-1(Entothelin-1,ET-1)和BNP兩種體液因子的影響以及上述兩種因子的變化規(guī)律,探討心肌梗死診治中的新途徑。
　　 方法:Wistar大鼠30只,13—16周齡,體重230-270克,均為雄性。術(shù)前大鼠被隨機(jī)分為①對(duì)照組(sham group,n=1.0)；②單純心肌梗死組(AMI group,n=10)③

5、心肌梗死+厄貝沙坦組(AMI+Irb group,n=10)。手術(shù)過程:大鼠經(jīng)10％水合氯醛麻醉(35mg/kg腹腔內(nèi)注射)后,固定于手術(shù)臺(tái)上。行氣管插管并連接呼吸機(jī),見大鼠胸廓隨呼吸機(jī)頻率起伏后證明插管成功。設(shè)定呼吸參數(shù)。75％酒精消毒切口部分,于胸骨左側(cè)做與胸骨平行的縱形切口,約1-1.5cm。分離打開各層肌肉,暴露心臟,擠破心包,迅速?gòu)棾鲂呐K,暴露心臟的左室游離壁。在左心耳與肺動(dòng)脈圓椎之間找到左冠狀動(dòng)脈,在動(dòng)脈起始點(diǎn)下方2—3mm

6、處,用6—0號(hào)絲線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支,結(jié)扎深度0.3-0.5mm。將心臟送回胸腔,用注射器抽出胸腔內(nèi)氣體,以恢復(fù)負(fù)壓,關(guān)閉胸腔,此步驟30秒內(nèi)完成。術(shù)中經(jīng)肉眼觀察,梗死區(qū)變蒼白為結(jié)扎成功的標(biāo)志?？p合各層肌肉,縫皮,撤呼吸機(jī)。對(duì)照組只開胸不結(jié)扎。術(shù)后大鼠保溫,單籠放置,待清醒后再次稱重、編號(hào),按組分籠飼養(yǎng)。以上手術(shù)均在無菌條件下進(jìn)行。嚴(yán)格按照以上規(guī)程執(zhí)行操作,以保證結(jié)扎部位、結(jié)扎操作時(shí)間和其他條件的一致性。
　　 AMI+Irb

7、組大鼠于術(shù)后將Irb(杭州賽諾菲制藥公司)按10mg/kg立即肌肉注射。以后每日上午按Irb50mg/kg溶于水2ml灌胃。對(duì)照組和心肌梗死組均肌注和喂給等容量生理鹽水。
　　 術(shù)后開始計(jì)時(shí),于6時(shí)、12時(shí)、18時(shí)、24時(shí)、3天、5天、7天和14天(第3天到第14天抽血時(shí)間為每天上午8:00)分別抽大鼠靜脈血1ml,放于試管中,以3000r/min離心10分鐘,并立即用塑料吸管將上層血清轉(zhuǎn)移至離心管中,標(biāo)上組別、鼠號(hào)和時(shí)間,置于

8、-80℃冰箱保存,于14天時(shí)集中測(cè)定ET-1和BNP指標(biāo)。大鼠血清ET-1和BNP濃度測(cè)定采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫法,試劑購(gòu)自于美國(guó)Rapidbio(RB)公司,酶標(biāo)儀為河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科的型號(hào)為TECAN的儀器。
　　 所有數(shù)據(jù)用SPSS13.0 for windows軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。大鼠血清ET-1和BNP水平及動(dòng)態(tài)變化用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析,當(dāng)總的組間變異F值有意義時(shí),數(shù)據(jù)用SNK(Student—Newman-Ke

9、uls)檢驗(yàn)以比較各組之間均數(shù)差異。為比較各具體時(shí)間點(diǎn)的組間差異,采用單因素方差分析,若F值有意義時(shí),再用SNK檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SEM)表示,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1大鼠血清ET-1和BNP水平的組間比較:AMI組、AMI+Irb組和對(duì)照組三組相比,各組間血清ET-1和BNP水平在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有明顯差異(各P值均<0.05),其有AMI組>AMI+Irb組>對(duì)照組的大小關(guān)系

10、。
　　 2各組大鼠血清ET-1和BNP水平的動(dòng)態(tài)變化:
　　 2.1大鼠血清ET-1水平的動(dòng)態(tài)變化AMI組和AMI+Irb組大鼠血清ET-1出現(xiàn)一個(gè)峰值,但AMI組峰值高且出現(xiàn)早,對(duì)照組血清ET-1濃度變化較平坦。(見Fig.1)
　　 2.2大鼠血清BNP水平的動(dòng)態(tài)變化AMI組大鼠血清BNP呈雙峰分泌,第一峰峰值高于AMI+Irb組,出現(xiàn)時(shí)間早,而AMI+Irb組血清BNP濃度只有一個(gè)峰值,對(duì)照組血清BNP濃

11、度變化較平坦。(見Fig.2)
　　 結(jié)論:
　　 1.AMI組大鼠血清ET-1和BNP水平高于對(duì)照組,說明血清ET-1和BNP升高參與了AMI后病情演變過程。
　　 2.AMI+Irb組大鼠血清ET-1和BNP水平低于AMI組,說明Irb能改善AMI后血清ET-1和BNP升高的程度,對(duì)AMI后病情變化有益。
　　 3.大鼠AMI后血清ET-1迅速升高,于7.8±0.92小時(shí)達(dá)一高峰(272.12±1.2

12、7pg/ml)后逐漸降低,在第14天時(shí)仍高于對(duì)照組。大鼠AMI后血清BNP的濃度呈雙峰分泌,在12.6±0.60小時(shí)達(dá)到第一峰值(412.00±3.95pg/ml),第二峰值(336.58±1.54 pg/ml)出現(xiàn)在第153.60±7.33小時(shí),此后繼續(xù)下降,但在第14天時(shí)仍高于對(duì)照組。表明在未加任何干預(yù)的情況下,大鼠AMI后血清ET-1較短時(shí)間內(nèi)即有唯一峰值,而BNP則存在先后兩個(gè)峰值。
　　 4.根據(jù)AMI+Irb組大鼠的