ABCG2等基因在對(duì)培美曲塞耐藥胰腺癌Patu8988細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：探討對(duì)培美曲塞耐藥胰腺癌Patu8988細(xì)胞相對(duì)于親本細(xì)胞在克隆形成能力及相關(guān)多藥轉(zhuǎn)運(yùn)耐藥基因的變化。針對(duì)其耐藥基因ABCG2，探討尼卡地平在無毒劑量下能否逆轉(zhuǎn)耐藥，為在臨床上千預(yù)腫瘤耐藥提供參考。
　　 方法：采用雙層軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)檢測對(duì)培美曲塞耐藥胰腺癌Patu8988與親本細(xì)胞克隆形成能力的差異；RT-PCR法檢測兩者ABCG2、ABCC3、ABCB1的mRNA表達(dá)水平，Wersten blot檢測ABCG2租ABC

2、C3的蛋白表達(dá)水平；免疫熒光及激光共聚焦檢測耐藥細(xì)胞中ABCG2的表達(dá)及分布；采用MTT實(shí)驗(yàn)分別檢測單用培美曲塞和聯(lián)合無毒劑量的尼卡地平對(duì)兩者IC50的影響；采用DAPI核染色和流式細(xì)胞檢測在耐藥細(xì)胞中單用與聯(lián)合用藥的凋亡差異。
　　 結(jié)果：對(duì)培美曲塞耐藥胰腺癌Patu8988相對(duì)于親本細(xì)胞克隆形成能力提高。RT-PCR及Wersten blot檢測中顯示ABCG2、ABCC3在耐藥細(xì)胞中mRNA及蛋白表達(dá)提高較多，ABCB1

3、mRNA表達(dá)提高較少。免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示耐藥細(xì)胞中ABCG2的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，激光共聚焦實(shí)驗(yàn)顯示耐藥細(xì)胞中ABCG2主要分布于細(xì)胞膜、胞漿內(nèi)也有少量分布。MTT實(shí)驗(yàn)顯示尼卡地平在濃度<2.5μg/mL（4.85μmol/L）時(shí)對(duì)兩種細(xì)胞基本無毒性作用；聯(lián)合培美曲塞與2.5μg/mL，濃度的尼卡地平作用48小時(shí)，相對(duì)于單用培美曲塞，親本細(xì)胞的IC50無明顯變化，而耐藥細(xì)胞IC50的降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DAPI核染色和流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)顯示在耐藥細(xì)