溶藻弧菌質(zhì)粒及耐藥性和致病性的研究.pdf

1、本研究主要從海南島部分近岸海域和患病水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)分離不同的溶藻弧菌菌株，研究該地區(qū)溶藻弧菌的質(zhì)粒、耐藥性和致病性，并探討其質(zhì)粒與耐藥性和致病性的關(guān)系，研究結(jié)果如下： 1.以海南島近岸海域內(nèi)的生活養(yǎng)殖混合區(qū)、養(yǎng)殖區(qū)和患病水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)外(病灶及各臟器部位)為菌種分離對(duì)象，采用TCBS培養(yǎng)基進(jìn)行溶藻弧菌菌株分離，通過(guò)溶藻弧菌快速鑒定試劑盒和傳統(tǒng)的生化鑒定相結(jié)合的方法，從約115株細(xì)菌中快速、準(zhǔn)確分離到60株不同來(lái)源的溶藻弧菌分離株，其

2、中，生活養(yǎng)殖混合區(qū)23株，養(yǎng)殖區(qū)29株，患病水產(chǎn)動(dòng)物8株； 2.采用堿裂解法提取溶藻弧菌各菌株的質(zhì)粒，構(gòu)建其質(zhì)粒圖譜。在所研究的60株溶藻弧菌中，12株菌株攜帶有質(zhì)粒，質(zhì)粒攜帶率為20％；這些菌株所攜帶的質(zhì)粒包括11種不同的類(lèi)型，其大小從1 kb到60 kb之間，每個(gè)菌株攜帶1～3個(gè)質(zhì)粒。根據(jù)所攜帶質(zhì)粒的大小與數(shù)量的不同，這60株菌株可分為7種質(zhì)粒類(lèi)型。在上述不同來(lái)源的菌株中，生活養(yǎng)殖混合區(qū)的攜帶質(zhì)粒菌株的數(shù)量最多，共9株；其次

3、是患病水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)外的菌株，共2株；最少的是養(yǎng)殖區(qū)菌株，只有1株。 3.采用美國(guó)臨床標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)推薦的K-B瓊脂法和杭州微生物試劑有限公司生產(chǎn)的40種成套藥敏紙片進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，溶藻弧菌分離株的耐藥性嚴(yán)重，每株菌株都有程度不同的“耐藥”現(xiàn)象。對(duì)50％以上的菌株都顯示“耐藥”的抗生素有23種，占檢測(cè)藥物總數(shù)的57.5％；對(duì)80％以上的菌株都顯示“耐藥”的抗生素有17種，占總藥物種類(lèi)的42.5％。所有菌株都有不同

4、程度的多重耐藥現(xiàn)象，多重耐藥率達(dá)100％。方差分析結(jié)果表明，生活養(yǎng)殖混合區(qū)分離株和養(yǎng)殖區(qū)分離株之間的耐藥性差異顯著(P<0.05)，生活養(yǎng)殖混合區(qū)分離株和患病水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)外分離株之間的耐藥性差異也達(dá)到了顯著水平(P<0.05)。對(duì)所分離的各菌株的耐藥性的研究結(jié)果表明，這些菌株對(duì)美洛西林等16種抗生素的耐藥譜完全相同，說(shuō)明這些藥物的耐藥基因很可能存在于這些菌株的質(zhì)粒DNA中。 4.將12株攜帶不同質(zhì)粒的菌株和隨機(jī)抽取的10株不攜帶

5、質(zhì)粒的菌株分別感染野生鯔魚(yú)(Mugil cephalus Linnseus)，從中篩選溶藻弧菌的毒株。攜帶質(zhì)粒的菌株HN06016(質(zhì)粒Ⅰ型)、HN06002(質(zhì)粒Ⅱ型)和 HN06003(質(zhì)粒Ⅳ型)和不攜帶質(zhì)粒的菌株(質(zhì)粒Ⅶ型)：HN06030和HN05005都對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物表現(xiàn)出較強(qiáng)的毒力，它們的LD<,50>分別為：HN06016：1.29×10<'5> CFU/g；HN06002：1.26×10<'5> CFU/g；HN06003：